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【應(yīng)用】HILIC親水色譜的應(yīng)用場(chǎng)景
瑞士步琦
HILIC親水色譜的應(yīng)用場(chǎng)景
色譜應(yīng)用
”
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簡(jiǎn)介
當(dāng)我們面對(duì)一些實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，潛意識(shí)里總是更傾向于用自己非常熟悉的某種方式或方法并嘗試進(jìn)行稍微調(diào)整就可以讓它適用于當(dāng)前面對(duì)的所有應(yīng)用研究。但這就像是說，您擁有一把切菜非常好用的刀并不意味著它是鋸木的最佳方法。今天給您再介紹一種分離方法：親水相互作用色譜（HILIC）。
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HILIC 是分離高極性化合物的理想選擇
高極性化合物通常不能用我們熟知的典型色譜柱分離，即正相色譜（NP）或反相色譜(RP)。在正相色譜當(dāng)中，由于化合物本身相對(duì)極性固定相來說過于粘稠，所以會(huì)導(dǎo)致洗脫時(shí)間過長(zhǎng)。而高極性化合物的特點(diǎn)是在水性流動(dòng)相中具有良好的溶解性，并且與典型的NP所用溶劑不兼容。而即使使用 NP 體系，高極性化合物卻幾乎不與非或弱極性的固定相進(jìn)行相互作用，最終與溶劑前沿一起被洗脫，達(dá)不到分離的目的。
每當(dāng)遇到這種情況的時(shí)候，就是 HILIC 的 Showtime！它的分離往往發(fā)生在極性固定相且可使用水的反相溶劑條件下。在這種情況下，與無水的流動(dòng)相相比，含水流動(dòng)相在極性固定相的表面形成了富水層。梯度洗脫從低極性有機(jī)溶劑開始，通過增加極性水的比例來洗脫極性化合物。
在正相色譜中固定相具有更高的極性，在反相色譜中流動(dòng)相通常由水與有機(jī)溶劑組成，而水則是色譜常用流動(dòng)相體系當(dāng)中使用的強(qiáng)極性洗脫劑。因此，HILIC 結(jié)合了正相色譜的固定相與反相色譜的流動(dòng)相的特點(diǎn)來專門“對(duì)付”高極性化合物。簡(jiǎn)單總結(jié)就是：HILIC 采用反相色譜流動(dòng)相體系，而按照正相色譜順序出峰。
盡管 HILIC 的混合模式機(jī)制至今仍在研究中，但主要的保留機(jī)制被認(rèn)為是化合物在富含有機(jī)物的流動(dòng)相和后來的富含水的流動(dòng)相之間的分配。除此之外，還包括其他相互作用，如氫鍵、靜電相互作用和偶極-偶極相互作用都有助于 HILIC 分離：
如果您對(duì) HILIC 色譜也感到躍躍欲試的話，我推薦您使用乙腈，因?yàn)樗c水具有良好的互溶性以及良好的 HILIC 保留和低粘度。當(dāng)然，您也可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況選擇其他有機(jī)溶劑。
HILIC 中的相對(duì)溶劑強(qiáng)度如下：
丙酮 < 丙醇 < 乙腈 < 乙醇 < 二惡烷 < DMF ~甲醇 < 水
就您的色譜固定相而言，任何極性相均可用于 HILIC 分離。例如：
固定相類型 | 固定相示例 | 固定相相組成 | 適用應(yīng)用 | 保留機(jī)制 |
中性 | 二醇；酰胺 | 極性官能團(tuán)，如：酰胺、天冬酰胺、二醇、交聯(lián)二醇、氰基和環(huán)糊精 | 親水化合物和混有中性、陰離子、陽離子的混合物 | 親水相互作用；無靜電相互作用 |
帶電離子 | Slica；氨基丙基相 | 陰離子或陽離子官能團(tuán) | 中性極性化合物 氨丙基相的伯氨基帶正電荷；因此，它對(duì)陰離子酸性化合物表現(xiàn)出較高親和力。 Slica表面含有pKa為3.5的酸性表面硅烷醇基團(tuán)，這意味著≥3.5pKa的pH值時(shí)，這些基團(tuán)將被離子化，從而使Slica固定相可以作為陽離子交換劑，與帶正電荷的堿基相互作用并對(duì)待分析物進(jìn)行保留 | 來自陰離子或陽離子官能團(tuán)的強(qiáng)靜電相互作用 |
兩性離子 | 氨基酸、氨基磺酸 | 帶正電荷（銨）和帶負(fù)電荷（磺酸）的官能團(tuán) | 由于它們的親水性和弱離子交換特性，這些固定相適用于分離中性、酸性和堿性分析物以及極性和親水性化合物以及無機(jī)離子 | 弱靜電相互作用 |
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結(jié)論
選擇理想 HILIC 固定相的一個(gè)好的原則是，通常來講中性化合物的親水性低于帶電化合物，而高親水性固定相需要保留它們（例如兩性離子和酰胺固定相）。另一方面，由于靜電引力，帶電化合物在帶電色譜柱上的保留太強(qiáng)，因此中性和兩性離子相提供更好的結(jié)果。
其實(shí)，不管正相色譜、反相色譜還是 HILIC 色譜等，都有其適合的應(yīng)用領(lǐng)域。即便 HILIC 結(jié)合了正相色譜與反相色譜的部分特征，也不代表其滿足所有應(yīng)用。就如同我們?nèi)粘３燥垥r(shí)，吃面往往用筷子是簡(jiǎn)單高效的方式；喝湯則是用勺子最佳。實(shí)驗(yàn)亦如此，所以在實(shí)驗(yàn)過程中還是要根據(jù)實(shí)際情況選擇最佳純化方式。
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