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?HCT-8人盲腸腺癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作步驟
HCT-8人盲腸腺癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作步驟
細(xì)胞傳代操作
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí)即可進(jìn)行傳代。首先棄去舊培養(yǎng)基，用預(yù)熱的PBS輕柔洗滌2次。加入適量0.25%胰蛋白酶（含EDTA），室溫消化約1-2分鐘。在倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞變圓、間隙增大時(shí)，立即加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。輕柔吹打細(xì)胞使其脫落，收集細(xì)胞懸液至離心管中，1000rpm離心5分鐘。棄上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按1:3至1:4比例接種于新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充適量培養(yǎng)基使總體積保持一致。
細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的細(xì)胞，建議在3-10代時(shí)進(jìn)行凍存。配制凍存液（含10%DMSO的培養(yǎng)基），將離心后的細(xì)胞沉淀用凍存液重懸至5×10^6/mL密度。分裝至凍存管中，采用梯度降溫法：4℃30分鐘→-20℃2小時(shí)→-80℃過(guò)夜，最后轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。復(fù)蘇時(shí)快速將凍存管置于37℃水浴中搖晃至融化，用預(yù)熱的培養(yǎng)基稀釋后離心去除DMSO，接種于培養(yǎng)瓶中。
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