新色譜柱如何進(jìn)行活化和平衡？

“我之前從未使用過這種色譜柱，它的活化過程有什么特別之處嗎？柱盒里沒有說明書，我該如何正確使用呢？”

操作指南：

色譜柱的填料類型豐富，主要包括反相、正相、HILIC、體積排阻、離子交換等，不同類型的色譜柱其啟用程序也存在差異。對于不熟悉的色譜柱一定要查閱其對應(yīng)的《使用維護(hù)指南》。

色譜柱壓力升高，如何有效沖洗？

“昨天我的色譜柱還能正常運(yùn)行序列，今天開機(jī)使用時(shí)卻出現(xiàn)了超壓現(xiàn)象？柱子壓力每天都會升高10 Mpa, 我要怎么做才能避免這種情況呢？”操作指南：色譜柱壓力升高，一般要從儀器系統(tǒng)、流動相、樣品狀態(tài)、色譜柱故障這幾個(gè)方面進(jìn)行排查。使用過程中的壓力升高，多數(shù)情況是由于樣品堆積引起的。因此首要解決方法就是沖洗色譜柱。

反相色譜柱的沖洗方案以20倍柱體積的溶劑對色譜柱進(jìn)行清洗，推薦的溶劑選擇如下：

HILIC色譜柱的沖洗方案使用20倍柱體積的50 : 50乙腈水溶液進(jìn)行沖洗，如果效果不理想，可以從100%乙腈逐漸過渡到0%乙腈，進(jìn)行幾個(gè)梯度的沖洗。

注：其他類型色譜柱，請參考《使用維護(hù)指南》

日常維護(hù)TIPS

提高樣品的潔凈度。必要時(shí)可以使用SPE的方式盡量去除多余基質(zhì)。每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，先用高水相等度洗脫10-20個(gè)柱體積，確保緩沖鹽及極性大的成分（如糖、醇等組分）沖洗干凈；再用梯度的方式過渡洗脫中等極性組分，梯度直至純有機(jī)相；最后用純有機(jī)相等度洗脫10-20個(gè)柱體積，確保非極性、強(qiáng)保留成分洗脫。柱溫在色譜柱耐受范圍內(nèi)可提高2-5度，方法運(yùn)行完及時(shí)關(guān)閉柱溫。當(dāng)樣品量大時(shí)建議分析過程中每隔30-40針清洗一次色譜柱。

新色譜柱無法重現(xiàn)老色譜柱的譜圖？可能踩了這些坑！

“我之前的項(xiàng)目就使用了這種色譜柱，但這個(gè)新柱子無法分離出同樣的結(jié)果？我的客戶用的就是這種柱子，為什么我們實(shí)驗(yàn)室做不出同樣的結(jié)果？”排查方向：復(fù)核新色譜柱的柱效；在同一臺儀器上，使用同一批流動相，分別在新舊色譜柱上運(yùn)行目標(biāo)樣品；考慮pH值對目標(biāo)物的影響，微調(diào)添加劑或鹽濃度。

方法開發(fā)TIPS

方法開發(fā)初期，盡量多考察不同批次的色譜柱，以驗(yàn)證方法的耐用性；增加添加劑或者緩沖鹽濃度，或者使用高濃度緩沖鹽老化新色譜柱后再使用；對pH值敏感的項(xiàng)目如肽藥，需要對pH精準(zhǔn)控制，流動相配置可采用稱重法。