賽默飛QuantStudio1實(shí)時熒光定量PCR（qPCR）儀支持多種熒光檢測方法，其核心原理基于染料法（如SYBR Green）和探針法（如TaqMan），通過熒光信號的變化實(shí)時監(jiān)測PCR擴(kuò)增過程，從而實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)核酸的定量分析。以下是其試劑和染料的工作原理：

一、染料法（SYBR Green）

1、原理：

SYBR Green是一種可嵌入DNA雙鏈小溝的熒光染料，在游離狀態(tài)下幾乎不發(fā)光，但一旦與雙鏈DNA（dsDNA）結(jié)合，熒光信號增強(qiáng)約1000倍。

2、特點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：成本低，適用于任何PCR產(chǎn)物（無需特異性探針）。

缺點(diǎn)：會結(jié)合所有雙鏈DNA（包括引物二聚體和非特異性產(chǎn)物），需通過熔解曲線分析（HRM）驗(yàn)證擴(kuò)增特異性。

3、QuantStudio1適配性：

已校準(zhǔn)支持FAM/SYBR Green I通道（激發(fā)/發(fā)射波長：~497/520 nm）。

二、探針法（TaqMan）

1、原理：

TaqMan探針是一種寡核苷酸，5′端標(biāo)記報(bào)告熒光基團(tuán)（如FAM、VIC），3′端標(biāo)記淬滅基團(tuán)（如TAMRA）。

當(dāng)探針完整時，熒光基團(tuán)的信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq DNA聚合酶的5′→3′外切酶活性切割探針，使熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，釋放熒光信號。

2、特點(diǎn)：

優(yōu)點(diǎn)：特異性高（僅靶序列擴(kuò)增時產(chǎn)生信號），支持多重檢測（不同探針標(biāo)記不同熒光基團(tuán)）。

缺點(diǎn)：探針合成成本較高。

3、QuantStudio1適配性：

支持FAM、VIC、ROX等熒光通道，可同時檢測3種靶標(biāo)（如FAM/VIC/ROX三通道檢測）。

三、被動參照染料（ROX校正）

作用：

ROX是一種不與DNA結(jié)合的熒光染料，用于校正孔間差異（如加樣誤差、耗材透光度差異）。

QuantStudio1內(nèi)置ROX校準(zhǔn)功能，提高數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性。

四、熒光檢測系統(tǒng)

QuantStudio1采用：

白光LED光源（寬光譜激發(fā)）和 CMOS成像系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)96孔同步檢測，避免逐孔掃描的時間誤差。

濾光片配置：FAM、VIC、ROX三通道，覆蓋常見熒光染料需求。

五、總結(jié)

QuantStudio1通過染料法和探針法實(shí)現(xiàn)高靈敏度（可檢測1.5倍差異）和多重檢測（3通道），結(jié)合ROX校正和同步成像技術(shù)，確保數(shù)據(jù)精準(zhǔn)可靠。用戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇SYBR Green（經(jīng)濟(jì)通用）或TaqMan探針（高特異性多重檢測）。