二氧化碳搖床(CO?培養(yǎng)箱)的消毒是確保細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境無(wú)菌的關(guān)鍵步驟。以下是詳細(xì)的消毒步驟和注意事項(xiàng):
一、消毒前準(zhǔn)備
1. 關(guān)閉設(shè)備
斷開(kāi)電源,關(guān)閉CO?氣源。
取出培養(yǎng)箱內(nèi)的所有培養(yǎng)物、隔板、水盤(pán)等可拆卸部件。
2. 清潔表面污漬
用中性洗滌劑或70%乙醇擦拭內(nèi)壁、門(mén)封和外部,去除可見(jiàn)污垢。
頑固污漬可用無(wú)菌蒸餾水或溫和去垢劑處理,避免腐蝕性清潔劑。
二、消毒方法
# 1. 濕熱滅菌(高壓蒸汽)
適用部件:可拆卸的隔板、水盤(pán)、支架等耐高溫部件。
步驟:
1. 121℃高壓滅菌15 20分鐘。
2. *底干燥后再放回培養(yǎng)箱。
#2. 化學(xué)消毒
常用消毒劑:
70%乙醇:擦拭內(nèi)壁,作用5 10分鐘。
過(guò)氧化氫(3 6%):噴灑或擦拭,靜置30分鐘后用無(wú)菌水擦凈。
季銨鹽類(lèi)(如苯扎氯銨):按說(shuō)明書(shū)稀釋使用。
步驟:
1. 噴灑或擦拭消毒劑,確保覆蓋所有角落。
2. 作用時(shí)間結(jié)束后,用無(wú)菌蒸餾水*底清除殘留。
# 3. 紫外線(xiàn)(UV)照射
使用培養(yǎng)箱自帶的UV燈(若無(wú)則需外置UV燈)。
照射時(shí)間:30分鐘至1小時(shí)(注意避開(kāi)橡膠/塑料部件)。
注意:UV穿透力有限,需配合其他消毒方式。
# 4. 高溫干熱滅菌(部分型號(hào)支持)
設(shè)定140℃維持2小時(shí)(需確認(rèn)設(shè)備耐受性)。
僅適用于無(wú)塑料/橡膠部件的空腔。
三、消毒后處理
1. 重新組裝
安裝已滅菌的隔板、水盤(pán)(加入無(wú)菌水保持濕度)。
檢查門(mén)封是否密封。
2. 預(yù)平衡環(huán)境
開(kāi)啟CO?和溫度至設(shè)定值(如37℃、5% CO?),穩(wěn)定24小時(shí)后再使用。
可放置無(wú)菌PBS或培養(yǎng)基測(cè)試無(wú)菌性。
3. 驗(yàn)證消毒效果
使用生物指示劑(如孢子試條)或定期微生物檢測(cè)。
四、注意事項(xiàng)
個(gè)人防護(hù):戴手套、口罩,避免消毒劑接觸皮膚。
消毒劑選擇:避免含氯或強(qiáng)氧化劑腐蝕不銹鋼內(nèi)膽。
頻率建議:
常規(guī)消毒:每1 2個(gè)月一次。
污染后:立即*底消毒。
記錄:記錄消毒日期、方法和責(zé)任人。
五、常見(jiàn)問(wèn)題
霉菌污染:可先用5%碳酸氫鈉擦拭,再消毒。
頑固生物膜:使用酶清潔劑預(yù)處理。
氣味殘留:延長(zhǎng)通風(fēng)時(shí)間或使用活性炭吸附。
通過(guò)規(guī)范操作和定期維護(hù),可有效降低污染風(fēng)險(xiǎn),確保細(xì)胞培養(yǎng)的可靠性。
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