在細胞與基因治療（CGT）邁向產(chǎn)業(yè)化的今天，如何在不依賴病毒載體的前提下，高效遞送復雜構(gòu)建體，成為工藝開發(fā)中的關(guān)鍵挑戰(zhàn)。Lonza最新發(fā)布的4D-Nucleofector® LV PRO模塊，正是為此而生。

非病毒遞送的“放大難題”

正在被解決

傳統(tǒng)電轉(zhuǎn)系統(tǒng)在小體積（如20μL或100μL）下表現(xiàn)良好，但一旦放大至臨床所需的10億級T細胞，效率、活性和一致性往往難以維持。LV PRO通過兩種全新耗材——2mL固定體積加樣盒（FV）與20mL流通式加樣盒（FT），實現(xiàn)了從微量到大體積的無縫擴展。

關(guān)鍵數(shù)據(jù)

在20μg/mL mRNA或12μg/mL質(zhì)粒DNA條件下，LV PRO在2mL和20mL體積中均實現(xiàn)了與100μL參考組相當?shù)霓D(zhuǎn)染效率（GFP+細胞比例）

細胞活性在轉(zhuǎn)染后24小時仍保持>90%

CRISPR編輯：

效率與一致性的雙重突破

在多個供體的實驗中，LV PRO在CRISPR敲除（TRAC KO）與敲入（RAB11A-GFP KI）中均展現(xiàn)出性能：

敲入效率：在7位供體、13組實驗中，LV PRO的敲入效率與100μL參考組一致，且在不同電轉(zhuǎn)程序下均表現(xiàn)穩(wěn)定

一致性：20mL流通式加樣盒在13個連續(xù)循環(huán)中，敲入效率與回收體積波動極小，表明系統(tǒng)具備高度工藝穩(wěn)定性

從電轉(zhuǎn)到擴增：

完整的細胞工程流程驗證

在G-Rex®生物反應器中，LV PRO轉(zhuǎn)染后的T細胞可實現(xiàn)53–70倍擴增，最終獲得超過4億個活細胞，驗證了其在下游培養(yǎng)中的兼容性與可擴展性。

適配多種構(gòu)建體與起始材料

無論是3.5kb還是1.4kb的HDR模板，LV PRO均可高效遞送；同時支持不同來源的T細胞（PBMC、CD3+，激活或靜息狀態(tài)），為工藝開發(fā)提供更大靈活性。

總結(jié)

LV PRO，不只是“放大”，更是“復制”

Lonza的LV PRO模塊不僅解決了非病毒遞送在大體積下的效率瓶頸，更通過一致性、靈活性與可擴展性，為CGT制造流程提供了真正可復制的解決方案。