一、產品信息

平臺編號：Bio-135678

規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞信息：原代細胞

細胞名稱：人原代Treg細胞

用途：研究

注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）

二、細胞詳述

調節(jié)性T細胞（Treg）是具有免疫調節(jié)活性的T細胞亞群，在維持機體的免疫耐受以及調控免疫應答過程中發(fā)揮重要作用。Treg細胞通過其表面表達一致性分子，分泌抑炎性細胞因子，直接發(fā)揮細胞毒作用以及改變抗原呈遞細胞的抗原提呈功能而發(fā)揮免疫調節(jié)作用。

CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞屬于CD4+T細胞亞群，占正常人外周血及脾臟組織中的CD4+T細胞的5%-10%。

三、細胞特性

1）細胞來源于外周血。

2）細胞鑒定：CD4和CD25免疫熒光染色為陽性。

3）經鑒定細胞純度高于90%。

4）不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5）細胞生長方式：懸浮培養(yǎng)。

四、產品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2)T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

五、產品使用

1)本產品僅能用于科研

2)本產品未通過直接用于活體動物和人的審核

3)本產品未通過用于活體診斷的審核

六、接受后的處理方法

1)收到細胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

2)請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml本公司附帶的培養(yǎng)基。

4)如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的培養(yǎng)基。

5)接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現污染或疑似污染,請及時與我們取得聯系。

七、細胞培養(yǎng)步驟

1、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

2、細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

下面T25瓶為例；

1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

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