G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）是人體內(nèi)最大且最重要的藥物靶點(diǎn)家族（超過(guò)30%的上市藥物作用于GPCR）。當(dāng)激動(dòng)劑（比如激素、神經(jīng)遞質(zhì)或藥物）結(jié)合GPCR后，除了激活下游信號(hào)通路，受體內(nèi)化（Internalization）作為藥物作用、療效差異和受體調(diào)控的核心環(huán)節(jié)，包含兩大關(guān)鍵途徑：β-arrestin依賴途徑（介導(dǎo)受體脫敏、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與內(nèi)化）、β-arrestin非依賴途徑（如網(wǎng)格蛋白直接內(nèi)吞、小窩蛋白途徑等）。精準(zhǔn)檢測(cè)GPCR內(nèi)化，是理解藥物-受體互作、預(yù)測(cè)療效差異、及開(kāi)發(fā)更安全有效的下一代藥物的“動(dòng)態(tài)觀測(cè)窗”。

圖1.GPCR信號(hào)傳導(dǎo)與內(nèi)化[1]

傳統(tǒng)GPCR內(nèi)化檢測(cè)是否令您感到“頭疼”

• 操作繁瑣耗時(shí)

• 通量太低

• 結(jié)果不穩(wěn)定

• 數(shù)據(jù)量化難

瑞孚迪（Revvity）解決方案

pHSense™ pH敏感型Eu探針——革新！

告別復(fù)雜，擁抱高效

• 真正均相免洗：全程在培養(yǎng)板內(nèi)操作，無(wú)需洗滌步驟

• 高靈敏&高通量

• 基于酶標(biāo)儀檢測(cè)，無(wú)需特殊設(shè)備

• 靈活適配您的模型

技術(shù)原理：pH驅(qū)動(dòng)的“信號(hào)開(kāi)關(guān)”

1胞外狀態(tài)（中性pH）：pHSense™ Eu探針位于細(xì)胞外，熒光信號(hào)極低（靜默）。

2內(nèi)化后（酸性內(nèi)體/溶酶體）：探針隨GPCR進(jìn)入酸性環(huán)境，觸發(fā)強(qiáng)烈、長(zhǎng)壽命的Eu熒光信號(hào)。

操作極簡(jiǎn)，典型操作僅需4步

以Anti-Flag為例：

1細(xì)胞鋪板過(guò)夜→棄上清

2加入pHSense™ Eu探針→孵育

3加入化合物（激動(dòng)劑/拮抗劑）

4酶標(biāo)儀讀數(shù)（可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)）

賦能您的創(chuàng)新研究

1高效藥物篩選：快速篩選靶向GPCR的先導(dǎo)化合物，評(píng)估其誘導(dǎo)/抑制內(nèi)化能力

2實(shí)時(shí)動(dòng)力學(xué)分析：動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)內(nèi)化速率、程度和時(shí)效，揭示藥物-受體作用過(guò)程。

3受體脫敏/耐受機(jī)制研究：探究長(zhǎng)期藥物刺激下的受體調(diào)控機(jī)制。

實(shí)例驗(yàn)證：清晰可靠的數(shù)據(jù)展現(xiàn)

圖2.使用pHSenseEu Anti-Flag檢測(cè)Exendin-4誘導(dǎo)的GLP1R-Flag（HEK293）內(nèi)化

結(jié)果清晰顯示Exendin-4濃度依賴的內(nèi)化響應(yīng)，信號(hào)強(qiáng)度隨激動(dòng)劑濃度升高而顯著增加。

圖3.使用pHSenseEu Anti-Flag檢測(cè)Exendin-4誘導(dǎo)的GLP1R-Flag（HEK293）實(shí)時(shí)內(nèi)化檢測(cè)

注意：

為確保pHSense™探針（特別是Fab anti-Human IgG/ anti-mouse IgG2）不影響GPCR天然功能，建議在關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)中同步驗(yàn)證GPCR信號(hào)通路（如cAMP-1/IP-1檢測(cè)）。

瑞孚迪：您的GPCR藥物研究伙伴！