一、細(xì)胞培養(yǎng)概述

永生化人星形膠質(zhì)細(xì)胞 - SV40 是一種重要的細(xì)胞模型，在神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究、藥物篩選等領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。成功的細(xì)胞培養(yǎng)是開展相關(guān)研究的基礎(chǔ)，以下是詳細(xì)的細(xì)胞培養(yǎng)操作使用指南。

二、培養(yǎng)基的配制與選擇

• 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 ：常用的有 DMEM/F12 和 MEM。DMEM/F12 培養(yǎng)基緩沖能力強(qiáng)、營養(yǎng)成分豐富，適合細(xì)胞長期培養(yǎng)；MEM 成分相對簡單，適用于對培養(yǎng)條件要求基礎(chǔ)的細(xì)胞。

• 血清添加 ：一般添加 10% 胎牛血清（FBS），其中的生長因子、激素等成分能促進(jìn)細(xì)胞增殖和貼壁。但在一些特殊研究中，也可采用無血清培養(yǎng)基，需根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。

三、細(xì)胞的復(fù)蘇與凍存

• 細(xì)胞復(fù)蘇 ：從液氮中取出冷凍管，迅速投入 37℃~38℃水浴中融化，約 1 分鐘左右，然后在 5 分鐘內(nèi)用培養(yǎng)液稀釋至原體積的 10 倍以上，低速離心 3-10 分鐘，去除上清，加新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)剛復(fù)蘇的細(xì)胞。

• 細(xì)胞凍存 ：選擇對數(shù)生長期細(xì)胞，胰酶消化后制成細(xì)胞懸液，加入凍存管并標(biāo)記。凍存液配制為含 20% 血清培養(yǎng)基、10% DMSO。凍存程序可采用標(biāo)準(zhǔn)程序、程序降溫儀、簡易程序或一般程序。

四、細(xì)胞的傳代

當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到鋪滿整個瓶底的有效基質(zhì)時，或者當(dāng)細(xì)胞濃度超出培養(yǎng)基的能力時，細(xì)胞生長停止或生長速度大大放緩，這時就需要進(jìn)行傳代。傳代時，先用胰蛋白酶消化細(xì)胞，然后按一定比例將細(xì)胞分散到新的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)。

五、細(xì)胞培養(yǎng)的觀察與記錄

• 肉眼觀察 ：主要觀察培養(yǎng)物的顏色及混濁度。若培養(yǎng)液顏色變黃、變渾濁等，可能提示細(xì)胞狀態(tài)不佳或受到污染。

• 顯微鏡觀察 ：定期在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長狀態(tài)等。正常的永生化人星形膠質(zhì)細(xì)胞 - SV40 呈梭形或星形，細(xì)胞質(zhì)豐富，核仁明顯等。

六、細(xì)胞培養(yǎng)的污染與防治

• 污染種類 ：常見的有細(xì)菌、酵母菌、霉菌和病毒等污染。

• 預(yù)防方法 ：嚴(yán)格無菌操作技術(shù)，如在超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行操作、使用無菌器械和試劑等；保持操作環(huán)境清潔；使用良好的細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制。

• 檢測與處理 ：可通過肉眼直接觀察法、培養(yǎng)檢查法、顯微鏡觀察法、PCR 檢測等方法檢測污染。一旦發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)及時采取相應(yīng)的處理措施，如丟棄培養(yǎng)物、使用抗生素等。