產(chǎn)品簡介：

       用分子生物學(xué)技術(shù)研究復(fù)雜的基因組，首先要求制備純凈的高分子質(zhì)量 DNA，一般分為兩個步驟，先裂解細(xì)胞、溶解 DNA，接著采用酶學(xué)或化學(xué)方法去除蛋白、RNA 以及其他大分子。

        哺乳動物基因組 DNA 抽提試劑盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用經(jīng)典的蛋白酶 K 處理法，可以抽提到 100～150kb 以上的基因組 DNA，提取的基因組 DNA 可用于 Southern 雜交、基因組 DNA 的PCR 擴(kuò)增及基因組 DNA 文庫的構(gòu)建等。該試劑盒的提取效率大致為：從 1g 組織可以提取到約 150～200μg 100kb 以上的基因組DNA，從 106～107Hela 細(xì)胞可以提取到約 5～50μg 100kb 以上的基因組 DNA。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、 組織或培養(yǎng)細(xì)胞

2、 PBS、無水乙醇、70%乙醇、25:24:1 酚/氯仿/異戊醇

3、 離心機(jī)、研缽、剪刀、恒溫箱、EP 管

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品：①組織樣本：切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結(jié)，將 100mg 凍結(jié)的組織用預(yù)冷的研缽和研杵研碎或用錘子將其搗成碎末；②培養(yǎng)細(xì)胞：收集貼壁生長或懸浮生長細(xì)胞培養(yǎng)液，貼壁生長細(xì)胞需先用胰蛋白酶消化液消化，再用 PBS 清洗 1 次。4℃離心機(jī)，1500rpm 離心 1～2min，棄上清，用 1～2ml 預(yù)冷的 PBS 再次懸浮離心， 如此 2 洗滌次。

2、每 1ml 樣品裂解液加入 5μl 的蛋白酶 K 溶液，混勻。每 50mg 組織或 5×107 細(xì)胞用0.45~0.55ml 樣品裂解液懸浮，懸浮應(yīng)充分，不應(yīng)留下結(jié)塊。

3、充分混勻，50℃振蕩下溫育 12～18h 或過夜。

4、加入等體積 25:24:1 酚/氯仿/異戊醇，輕輕混合，盡可能減少對 DNA 的剪切。

5、吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積酚/氯仿

/異戊醇再抽提 1 次；重復(fù)該步驟 1 次。

6、吸取上層液(水溶液)250～300μl 至新 EP 管中，加入等體積無水乙醇和 1/4 體積的乙酸銨溶液，顛倒混勻數(shù)次。4℃ 10000rpm 離心 1min，棄上清。

7、向沉淀中加入 70%乙醇，4℃ 10000rpm 離心 1min，棄上清。重復(fù)該步驟一次。

8、盡量吸除殘余的乙醇，空氣干燥，等到不到明顯液體時，立即加入 50～100μl Nuclease Free Water 溶解 DNA，4℃或-20℃保存。注意：不可過分干燥基因組 DNA 沉淀，否則會極難溶解；如果發(fā)現(xiàn) DNA 沉淀難以溶解，可以在 4℃用搖床緩慢搖動過夜，以溶解 DNA 沉淀。

9、A260/A280 處檢測 DNA 純度，高純度的 DNA 一般 A260/A280＞1.8。

注意事項：

1、如果打算提取大片段的基因組 DNA，應(yīng)盡量避免基因組 DNA 的物理性剪切。例如避免劇烈振蕩含有基因組 DNA 的樣品，可以用剪掉槍頭尖的槍頭吸取基因組 DNA 的樣品。

2、準(zhǔn)備細(xì)胞樣品時，如果細(xì)胞量過少(＜3×107)，應(yīng) 0.3ml 含蛋白酶 K 的樣品裂解液。

3、為避免高分子質(zhì)量 DNA 被剪切，可以不采用乙醇沉淀 DNA，可用透析袋替代乙醇：在

100 倍體積的 TE Buffer 中至少透析 2 次，所用取全部時間應(yīng)＞24h。

4、不可過分干燥基因組 DNA 沉淀，否則會極難溶解。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

6、試劑開封后請盡快使用，以防影響后續(xù)實驗效果。

有效期：12 個月有效；低溫運(yùn)輸，按要求保存。