CY3-5TAMRA-KKKSPGEYVNIEFG-NH2,CY3標(biāo)記磷酸化酪氨酸肽衍生物的結(jié)構(gòu)
英文名稱:CY3-5TAMRA-KKKSPGEYVNIEFG-NH2
中文名稱:CY3-5TAMRA-磷酸化酪氨酸肽衍生物(KKKSPGEYVNIEFG-NH?)
分子結(jié)構(gòu)與修飾特征
CY3-5TAMRA-KKKSPGEYVNIEFG-NH? 是一款雙染料標(biāo)記的多肽探針,結(jié)合了兩個(gè)常用熒光染料CY3和5-TAMRA(5-羧基四甲基羅丹明),分別修飾于肽鏈的N端和內(nèi)部賴氨酸殘基或C端,從而賦予該分子多通道熒光檢測(cè)能力。該多肽主鏈序列為 KKKSPGEYVNIEFG-NH?,其中包含關(guān)鍵的絲氨酸(S)和酪氨酸(Y)殘基,可能是生物體內(nèi)信號(hào)通路中的磷酸化位點(diǎn)。C端的酰胺化(-NH?)處理可提高肽段的穩(wěn)定性,并減少其在細(xì)胞中的非特異性降解。
生物學(xué)應(yīng)用背景
該多肽的核心序列 KKKSPGEYVNIEFG 來源于天然蛋白質(zhì)的特定片段,尤其富含可被蛋白激酶修飾的氨基酸位點(diǎn),例如絲氨酸(Ser)和酪氨酸(Tyr),適用于與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的研究。由于酪氨酸和絲氨酸在信號(hào)通路中往往作為磷酸化位點(diǎn)存在,該序列可用于模擬蛋白磷酸化事件,從而用于激酶活性檢測(cè)、底物篩選、蛋白相互作用分析等實(shí)驗(yàn)。特別是在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控、蛋白質(zhì)修飾識(shí)別等研究場(chǎng)景中,該分子可作為探針工具參與磷酸化特異性的研究。
雙熒光標(biāo)記的意義
該分子特別之處在于同時(shí)標(biāo)記了 CY3 和 5-TAMRA 兩種染料,具備多波長(zhǎng)激發(fā)和檢測(cè)能力。CY3 常用于橙紅色熒光通道(激發(fā)波長(zhǎng)約550 nm,發(fā)射570 nm),而5-TAMRA 發(fā)出紅色熒光(激發(fā)波長(zhǎng)約540-550 nm,發(fā)射約580-590 nm)。雙染料設(shè)計(jì)可用于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)實(shí)驗(yàn),適用于蛋白-蛋白相互作用檢測(cè)、構(gòu)象變化監(jiān)測(cè)、蛋白酶活性檢測(cè)等多種應(yīng)用形式。此外,通過兩個(gè)不同通道的信號(hào)對(duì)比,還能提高檢測(cè)的精度和信噪比,減少背景干擾。
應(yīng)用領(lǐng)域示例
用于激酶底物識(shí)別與篩選實(shí)驗(yàn)
用于FRET技術(shù)研究蛋白構(gòu)象變化
作為帶有特定磷酸化識(shí)別位點(diǎn)的探針參與信號(hào)通路分析
可用于細(xì)胞培養(yǎng)體系中進(jìn)行動(dòng)態(tài)磷酸化跟蹤實(shí)驗(yàn)
適合于分子成像或流式細(xì)胞術(shù)中多通道檢測(cè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
物化性質(zhì)概述
該多肽的序列包含多個(gè)帶正電的賴氨酸殘基(K),使得整體分子在生理pH下偏向堿性,利于與負(fù)電荷的細(xì)胞膜或DNA等分子相互作用。此外,雙熒光修飾結(jié)構(gòu)增大了分子質(zhì)量和疏水性,因此在使用時(shí)需注意溶劑選擇,通常推薦使用含有少量DMSO的緩沖體系或在pH中性至微堿性的條件下進(jìn)行溶解。
產(chǎn)地:西安瑞禧生物
用途:科研
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