一、細胞簡介

平臺編號：Bio-132546

規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞信息：原代細胞

細胞名稱：小鼠視網(wǎng)膜微血管周細胞

細胞用途：研究

注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）

二、細胞詳述

視網(wǎng)膜微血管周細胞是視網(wǎng)膜微血管的重要組成部分，與內皮細胞及基底膜共同構成微血管壁。

周細胞是一種具有部分平滑肌特性的細胞，分布于微血管內皮和基底膜之間，周細胞具有多種功能并與視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展息息相關。周細胞對糖尿病狀態(tài)下機體內各種代謝產(chǎn)物的濃度變化高度敏感，周細胞的凋亡增多會破壞毛細血管的完整性和穩(wěn)定性，進一步引起微動脈瘤，出血。

三、細胞特性

1)組織來源于實驗動物的正常眼睛組織。

2)細胞鑒定：PDGFR-β免疫熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

四、產(chǎn)品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于  1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存 1個月。

2)T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過 85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

五、產(chǎn)品使用

1)本產(chǎn)品僅能用于科研

2)本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核

3)本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核

六、細胞培養(yǎng)操作

換液周期2-3天

培養(yǎng)基體積T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml

傳代比例1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；

2、加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；

3、T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；

4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；

5、消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化；

6、混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；

7、加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；

8、補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

注意事項：不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間

消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。

七、細胞凍存操作

凍存液配方92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);

凍存規(guī)格200-300萬/ml，1ml每管

凍存方法

1、消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；

2、將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；

3、將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存。

注意事項：凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案。

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