人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)是一種依賴于鎂離子或錳離子的 DNA 聚合酶,它與其他 DNA 聚合酶的顯著區(qū)別在于,其催化核苷酸聚合時不需要模板鏈的引導(dǎo),能夠?qū)⒚撗鹾塑账犭S機(jī)添加到 DNA 分子的 3' - 羥基末端,因此也被稱為模板非依賴性 DNA 聚合酶。
從分布來看,TdT 主要在未成熟的淋巴細(xì)胞中表達(dá),尤其是在骨髓中的前 B 細(xì)胞和前 T 細(xì)胞階段表達(dá)最為活躍。在成熟的淋巴細(xì)胞中,TdT 的表達(dá)量會顯著降低甚至消失。此外,在某些造血系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞中,如急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞,TdT 常常會異常高表達(dá),這使得它成為診斷這類疾病的重要標(biāo)志物之一。
在檢測指標(biāo)方面,TdT 的表達(dá)水平通常以酶的活性單位或蛋白質(zhì)的濃度來表示。通過特定的檢測方法,能夠準(zhǔn)確測定樣本中 TdT 的含量或活性,為相關(guān)疾病的診斷和研究提供重要數(shù)據(jù)。
生理功能
TdT 在機(jī)體的免疫系統(tǒng)發(fā)育過程中具有重要的生理功能,主要體現(xiàn)在以下幾個方面:
參與免疫球蛋白和 T 細(xì)胞受體基因重排:在未成熟淋巴細(xì)胞的發(fā)育過程中,免疫球蛋白基因和 T 細(xì)胞受體基因會發(fā)生重排,這一過程是產(chǎn)生免疫多樣性的關(guān)鍵。TdT 能夠在基因重排過程中,將隨機(jī)的脫氧核苷酸添加到 V、D、J 基因片段連接的末端,增加了基因重排的多樣性,從而使機(jī)體能夠產(chǎn)生數(shù)量龐大、特異性各異的免疫球蛋白和 T 細(xì)胞受體,以應(yīng)對外界環(huán)境中多種多樣的病原體。
促進(jìn)淋巴細(xì)胞的發(fā)育成熟:TdT 的表達(dá)與淋巴細(xì)胞的發(fā)育階段密切相關(guān),它在淋巴細(xì)胞的早期發(fā)育階段發(fā)揮作用,參與調(diào)控淋巴細(xì)胞的分化和成熟過程。通過影響基因重排的多樣性,TdT 有助于篩選出能夠識別自身抗原并產(chǎn)生適當(dāng)免疫應(yīng)答的淋巴細(xì)胞,對免疫系統(tǒng)的正常發(fā)育和功能維持至關(guān)重要。
檢測原理
人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 (TdT) ELISA 試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)的原理設(shè)計(jì)而成。該試劑盒的酶標(biāo)板微孔內(nèi)預(yù)先包被了抗人 TdT 的特異性單克隆抗體,當(dāng)加入待檢測的樣本(如細(xì)胞裂解液、血清等)時,樣本中的 TdT 會與酶標(biāo)板上的包被抗體特異性結(jié)合,形成抗原 - 抗體復(fù)合物。
經(jīng)過洗滌步驟去除未結(jié)合的雜質(zhì)后,加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗人 TdT 多克隆抗體作為二抗,二抗會與復(fù)合物中的 TdT 特異性結(jié)合,形成 “包被抗體 - TdT - 酶標(biāo)二抗” 的夾心結(jié)構(gòu)。再次洗滌后,加入底物溶液(如 TMB),HRP 會催化底物發(fā)生顯色反應(yīng),顯色的深淺與樣本中 TdT 的含量成正比。最后,使用酶標(biāo)儀測定各孔的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可計(jì)算出樣本中 TdT 的具體含量.
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