近年來(lái)，PROTAC在藥物研發(fā)領(lǐng)域迅速崛起，成為藥物開(kāi)發(fā)的重要模式之一。VAV1作為一種新興靶點(diǎn)，是 T細(xì)胞和B細(xì)胞受體下游的關(guān)鍵信號(hào)蛋白，VAV1 的降解，導(dǎo)致與免疫介導(dǎo)病癥相關(guān)的細(xì)胞因子顯著減少，在自身免疫和慢性炎癥性疾病中的潛在治療價(jià)值備受關(guān)注。

VAV1基礎(chǔ)信息

VAV1（Vav鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子1）是一種重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，屬于Vav家族成員之一。VAV1主要在造血細(xì)胞中表達(dá)，包括T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、粒細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞，VAV1基因定位于人染色體7p15，包含21個(gè)外顯子。VAV1蛋白具有多結(jié)構(gòu)域。

圖1 VAV1結(jié)構(gòu)域示意圖

鈣調(diào)蛋白同源（CH）結(jié)構(gòu)域：這個(gè)結(jié)構(gòu)域參與鈣離子（Ca2?）的動(dòng)員。鈣離子在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起著重要的調(diào)節(jié)作用，例如在免疫細(xì)胞激活過(guò)程中，鈣離子的釋放可以觸發(fā)一系列下游信號(hào)通路。

酸性（Ac）基序：哺乳動(dòng)物的Vav蛋白中含有3個(gè)調(diào)節(jié)酪氨酸的基序，而果蠅中的DroVav蛋白含有1個(gè)。這些酪氨酸殘基可以通過(guò)磷酸化來(lái)調(diào)節(jié)VAV1的活性，磷酸化狀態(tài)會(huì)影響其與其他蛋白的相互作用和功能。

Dbl同源（DH）結(jié)構(gòu)域：這是一個(gè)高度保守的區(qū)域，是VAV1作為Rho GTP酶的磷酸化依賴(lài)性GDP/GTP交換因子（GEF）的關(guān)鍵功能域。它能夠促進(jìn)Rac/Rho GTP酶從GDP（非活性狀態(tài)）到GTP（活性狀態(tài)）的交換，從而激活Rho GTP酶。

Plekstrin同源（PH）結(jié)構(gòu)域：通常PH結(jié)構(gòu)域參與磷脂結(jié)合和細(xì)胞膜定位，有助于將VAV1定位到細(xì)胞膜上，從而更有效地參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。

VAV1功能

VAV1是一種多功能域蛋白質(zhì)既具有鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子（GEF）功能，又作為支架蛋白參與不依賴(lài)GEF的信號(hào)通路。

GEF依賴(lài)性功能

激活Rac/Rho家族GTPases：VAV1的主要GEF依賴(lài)性功能是激活Rac/Rho家族GTPases。當(dāng)VAV1被酪氨酸磷酸化時(shí)，其GEF活性被激活，催化Rho GTP酶上的GDP被GTP替換，從而使Rho GTP酶從非活性狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榛钚誀顟B(tài)。

細(xì)胞骨架重組：激活的Rac/Rho家族GTPases會(huì)引發(fā)肌動(dòng)蛋白重組和F-肌動(dòng)蛋白聚合，進(jìn)而影響細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)。例如，在T細(xì)胞中，VAV1通過(guò)激活Rac1促進(jìn)肌動(dòng)蛋白聚合，有助于T細(xì)胞與抗原呈遞細(xì)胞（APCs）之間免疫突觸的形成。

細(xì)胞遷移與粘附：VAV1通過(guò)激活Rho GTP酶，調(diào)節(jié)整合素介導(dǎo)的細(xì)胞粘附激活，并參與趨化因子介導(dǎo)的細(xì)胞遷移。在巨噬細(xì)胞中，VAV1的活性對(duì)于CSF-1介導(dǎo)的趨化性和吞噬作用是必需的。

受體聚集與信號(hào)傳導(dǎo)：VAV1的GEF活性有助于T細(xì)胞受體（TCR）和B細(xì)胞受體（BCR）的聚集，從而增強(qiáng)受體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)。

圖2 VAV1在抗原受體信號(hào)傳導(dǎo)中的作用

VAV1是抗原受體信號(hào)傳導(dǎo)復(fù)合體的關(guān)鍵組成部分，與(A)T細(xì)胞受體(TCR)/CD3及(B)B細(xì)胞受體相關(guān)聯(lián)。在T細(xì)胞中，SLP76通過(guò)其SH2結(jié)構(gòu)域被募集至T細(xì)胞跨膜活化連接蛋白(LAT)，形成的LAT/SLP76復(fù)合體作為T(mén)CR近端信號(hào)復(fù)合體中其他蛋白質(zhì)（包括VAV1）的關(guān)鍵支架。VAV1通過(guò)SH2結(jié)構(gòu)域和富含脯氨酸區(qū)域/SH3結(jié)構(gòu)域與其他蛋白質(zhì)相互作用。在B細(xì)胞中，VAV1參與的信號(hào)復(fù)合體包含與SLP76同源的支架蛋白SLP65（亦稱(chēng)B細(xì)胞連接蛋白）、布魯頓酪氨酸激酶(BTK)、生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2(Grb2)以及磷脂酶γ(PLCγ)2。這些蛋白復(fù)合體的組裝會(huì)激活下游事件。VAV1依賴(lài)GEF的主要功能是激活Rac/Rho家族GTP酶。在T細(xì)胞和B細(xì)胞中，分別通過(guò)CD28和CD19的共刺激對(duì)于VAV1的最佳磷酸化及下游信號(hào)通路的激活至關(guān)重要。

GEF非依賴(lài)性功能

作為支架蛋白：VAV1在GEF非依賴(lài)通路中主要作為支架蛋白發(fā)揮作用。它通過(guò)各種接頭結(jié)構(gòu)域與其他蛋白質(zhì)結(jié)合，參與抗原受體-近端信號(hào)復(fù)合物的形成。例如，VAV1與磷脂酶C-γ（PLCγ）1相互作用，對(duì)于TCR介導(dǎo)的鈣離子釋放和NFAT通路的激活至關(guān)重要。

促進(jìn)細(xì)胞存活和細(xì)胞周期進(jìn)程：VAV1以不依賴(lài)GEF的方式促進(jìn)細(xì)胞存活和細(xì)胞周期進(jìn)程，從而促進(jìn)DNA損傷反應(yīng)。

調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激反應(yīng)：VAV1還參與氧化應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)，通過(guò)其非依賴(lài)性功能影響細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡。

VAV1與疾病的關(guān)系

自身免疫和慢性炎癥疾?。?/strong>VAV1的異常表達(dá)或功能失調(diào)與多種自身免疫病和慢性炎癥性疾病有關(guān)，如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病和銀屑病等。因此，VAV1被認(rèn)為是治療這些疾病的潛在靶點(diǎn)。

腫瘤：在惡性腫瘤中，如乳腺癌、肺癌等，VAV1的過(guò)表達(dá)通常與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。

隨著新型分子膠等藥物研發(fā)技術(shù)的發(fā)展，針對(duì)VAV1的干預(yù)措施顯示出治療自身免疫和慢性炎癥疾病的潛力。例如，MRT-6160作為一種VAV1靶向的分子膠降解劑，在臨床前和早期臨床研究中表現(xiàn)出顯著的療效。

基于TR-FRET快速的檢測(cè)介導(dǎo)DDB1/CRBN 復(fù)合體與VAV1相互作用的小分子

DDB1/CRBN 和 VAV1 之間的相互作用是通過(guò)使用Eu標(biāo)記的抗Tag1抗體（TR-FRET 供體）和 Accepter 標(biāo)記的抗 Tag2 抗體（TR-FRET受體）檢測(cè)的。由于分子膠 MRT-6160 介導(dǎo)了 DDB1/CRBN 與 VAV1 的相互作用，供體抗體與受體抗體接近，供體抗體的激發(fā)會(huì)觸發(fā)向受體抗體的熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET），使受體抗體特異性發(fā)射665nm波長(zhǎng)的信號(hào)。該特定信號(hào)與 MRT-6160  和 DDB1/CRBN、VAV1 的相互作用的程度成正比。該均相實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，無(wú)需洗滌步驟。

以下數(shù)據(jù)不能代替實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)，只作為示例，結(jié)果可能因TR-FRET兼容儀器而異。

VAV1抗體

abs100534  Mouse anti-VAV1 Monoclonal Antibody(1582CT802.383.58)

TR-FRET熒光素定制標(biāo)記服務(wù)，助力TR-FRET實(shí)驗(yàn)開(kāi)發(fā)

參考文獻(xiàn)

[1]Neurath MF, Berg LJ. VAV1 as a putative therapeutic target in autoimmune and chronic inflammatory diseases. Trends Immunol. 2024 Aug;45(8):580-596. doi: 10.1016/j.it.2024.06.004. Epub 2024 Jul 26. PMID: 39060140.

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