酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）是一種廣泛應(yīng)用的免疫學(xué)檢測技術(shù)，用于定性和定量檢測生物樣品中的抗體或抗原。其原理是將抗原-抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后產(chǎn)生的顯色反應(yīng)來判定結(jié)果。ELISA檢測方法主要有四種類型：直接法、間接法、雙抗體夾心法和競爭法。

l 直接ELISA：這種類型主要用于檢測抗原。抗原被固定在酶標(biāo)板上，然后加入特異性抗體和酶標(biāo)記的二抗，通過底物顯色來檢測抗原的存在。直接ELISA操作簡單，但信號放大效應(yīng)有限，敏感性不如其他類型。

l 間接ELISA：這是檢測抗體的常用方法。

1、固相抗原包被：將已知抗原固定在酶標(biāo)板的孔中，形成固相抗原。

2、待測抗體結(jié)合：將待測樣本（含有待檢抗體）加入孔中，抗體與固相抗原結(jié)合。

3、洗板：洗滌以去除未結(jié)合的抗體。

4、加入酶標(biāo)二抗：加入酶標(biāo)記的二抗，該二抗能特異性結(jié)合到一抗上。

5、洗滌：再次洗滌以去除未結(jié)合的二抗。

6、底物顯色：加入酶作用的底物，底物在酶的作用下產(chǎn)生顏色變化。

7、結(jié)果讀?。和ㄟ^酶標(biāo)儀在特定波長下讀取OD值，OD值與待測抗體的量成正比。

l 雙抗夾心ELISA：這種類型用于檢測抗原，通過兩種特異性抗體夾住待測抗原來進行檢測。雖然理論上可以用來檢測抗體，但實際應(yīng)用中很少使用，因為制備兩種特異性抗體的難度較大。

1、固相抗原包被：將已知抗原固定在酶標(biāo)板的孔中。

2、待測抗體結(jié)合：將待測樣本加入孔中，抗體與固相抗原結(jié)合。

3、洗滌：洗滌以去除未結(jié)合的抗體。

4、加入酶標(biāo)抗原：加入酶標(biāo)記的抗原，該抗原能特異性結(jié)合到待測抗體上。

5、洗滌：再次洗滌以去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗原。

6、底物顯色：加入酶作用的底物，底物在酶的作用下產(chǎn)生顏色變化。

7、結(jié)果讀?。和ㄟ^酶標(biāo)儀在特定波長下讀取OD值，OD值與待測抗體的量成正比。

l 競爭性ELISA：主要用于檢測抗原，通過固定抗原和競爭性結(jié)合來實現(xiàn)檢測。這種方法的敏感性在低濃度待測抗原時可能不如間接ELISA。

1、固相抗原包被：將已知抗原固定在酶標(biāo)板的孔中。

待測抗體結(jié)合：將待測樣本加入孔中，抗體與固相抗原結(jié)合。

2、洗滌：洗滌以去除未結(jié)合的抗體。

3、加入酶標(biāo)抗原：加入酶標(biāo)記的抗原，該抗原能特異性結(jié)合到待測抗體上。

4、洗滌：再次洗滌以去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗原。

5、底物顯色：加入酶作用的底物，底物在酶的作用下產(chǎn)生顏色變化。

6、結(jié)果讀?。和ㄟ^酶標(biāo)儀在特定波長下讀取OD值，OD值與待測抗體的量成正比。

ELISA的優(yōu)點包括操作簡便、成本相對較低、適用于高通量檢測等。ELISA因其高特異性和靈敏度，廣泛應(yīng)用于臨床診斷、食品安全、藥物檢測等多個領(lǐng)域，是生物醫(yī)學(xué)研究中的重要工具。