水生拉恩氏菌，革蘭氏陰性桿菌，小的桿狀細(xì)胞，0.5～0.7μm×2～ 3μm。25℃生長(zhǎng)時(shí)運(yùn)動(dòng)，硝酸鹽還原到亞硝酸鹽。主要用途是研究；教學(xué)。具體用途是飼料用纖維素酶、植酸酶、木聚糖酶等的篩選。

一、菌種簡(jiǎn)介

平臺(tái)編號(hào)：Bio-74043

規(guī)格：凍干粉

拉丁屬名：Rahnella Aquatilis

菌種名稱：水生拉恩氏菌

拉丁文名：Rahnella aquatilis

其他編號(hào)：JCM 1683。=ATCC 33071=DSM 4594 =NBRC 105701

培養(yǎng)基編號(hào)：96,194

培養(yǎng)溫度：37℃

分離源：飲用水

相關(guān)的培養(yǎng)基詳細(xì)信息如下：

培養(yǎng)基編號(hào)：96

名稱：Nutrient agar NO. 2

備注：Peptone 10.0g Beef extract 10.0g NaCl 5.0g Agar 15.0g Distilled water 1000ml Adjust pH to 7.0 - 7.2

培養(yǎng)基編號(hào)：194

名稱：Nutrient broth with 0.5% NaCl

備注：Bacto peptone 5.0g Beef extract 3.0g NaCl 5.0g Distilled water 1.0L Adjust pH to 7.0

用途：研究

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）

保藏條件：斜面菌種和安瓿瓶?jī)龈删N應(yīng)在 2-8°C 保存。西林瓶請(qǐng)置于-20°C 保存。甘油管請(qǐng)置于-80°C 保存;請(qǐng)勿長(zhǎng)期置于室溫。

二、形態(tài)特征

水生拉恩氏菌，細(xì)胞圓形、橢圓形或柱形。無性繁殖為多邊出芽。某些種可形成假菌絲，但決無真菌絲。菌落乳白色、有光澤、較平坦、邊緣整齊。在液體培養(yǎng)時(shí)通常不形成菌醭。營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞多為雙倍體，也有多倍體。有性生殖時(shí)產(chǎn)生子囊孢子。

三、培養(yǎng)基

營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA）；

四、使用范圍

(1)合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚,組成成分精確,重復(fù)性強(qiáng),而且微生物在這類培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較慢。如高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基、察氏(Czapek)培養(yǎng)基等。

(2)天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成,如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯,前者用于培養(yǎng)霉菌,后者用于培養(yǎng)細(xì)菌。這類培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定,也難以確定,但配制方便,營(yíng)養(yǎng)豐富,培養(yǎng)效果好,所以常被采用。

(3)半合成培養(yǎng)基。在天然有機(jī)物的基礎(chǔ)上適當(dāng)加入已知成分的無機(jī)鹽類,或在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加某些天然成分,如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需要。

五、培養(yǎng)方法

1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長(zhǎng)基質(zhì)組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級(jí)種)、原種(二級(jí)種)和栽培種(三級(jí)種)三級(jí)。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復(fù)篩。

2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴(kuò)大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質(zhì)量的純菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進(jìn)一步擴(kuò)大菌體量及合成產(chǎn)物之用。

3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。

4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長(zhǎng)時(shí)間。所得孢子還需進(jìn)一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對(duì)于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。

5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在 上延續(xù)使用半年左右。

6、如果有些 菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長(zhǎng)、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機(jī)鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應(yīng)生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。

六、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、稱量→溶化→調(diào)pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查

2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物

3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查

4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌

七、注意事項(xiàng)

1）凍干活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用無菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過 2 支斜面或平板；或直接接種液體培養(yǎng)基，以不超過 5ml 為宜）；

2）經(jīng)過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)可能會(huì)延遲生長(zhǎng)，這時(shí)需較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間； 若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn)，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)；如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；二次接種量要多，固體斜面培養(yǎng)基水分要少才能讓菌體長(zhǎng)得比較明顯，液體培養(yǎng)要靜止培養(yǎng)；

3）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；

4）菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；

5）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；

6）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系；

7）如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請(qǐng)?jiān)谑盏胶?2 個(gè)月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；

8）打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛；

9）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作；

10）甘油管使用：使用本甘油菌時(shí)可以不用融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細(xì)菌的活力會(huì)逐漸下降。

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