熒光定量 PCR 一站式解決方案(3)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time polymerase chain reaction)是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過(guò)內(nèi)參或者外參法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。它結(jié)合了PCR技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù),能夠在PCR反應(yīng)過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)DNA的擴(kuò)增情況 [1],從而實(shí)現(xiàn)對(duì)靶DNA的定量分析。
【主要優(yōu)勢(shì)】
1全流程閉環(huán)
樣本→RNA質(zhì)檢→引物設(shè)計(jì)→qPCR→熔解曲線→2-??Ct差異分析→發(fā)表級(jí)圖表。
2 三大質(zhì)控
• RNA 260/280≥2.0,28S/18S≥2倍亮帶;
• 每對(duì)引物Blast+Oligo雙重驗(yàn)證,確保單峰熔解曲線;
• ABI 7900經(jīng)典機(jī)型,96孔板CV<5%,Ct重現(xiàn)性
3樣本“不挑”
動(dòng)物組織、細(xì)胞、血液、拭子、FFPE、外泌體……統(tǒng)統(tǒng)搞定!50 ng/μl RNA即可上機(jī)。
4真實(shí)案例
• 阿爾茨海默?。阂淮涡则?yàn)證224個(gè)差異基因,qPCR結(jié)果與RNA-Seq趨勢(shì)100%一致,客戶(hù)3個(gè)月即接收《Journal of Neuroinflammation》。
• 植物抗逆:PbNHX1鹽脅迫研究,從RNA到數(shù)據(jù)僅用18天,助力客戶(hù)拿下國(guó)家自然科學(xué)基金。
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