一、菌種簡介

副溶血弧菌(Fujino et al. 1951) Sakazaki et al. 1963是革蘭氏陰性的菌棒狀、弧狀、卵圓狀無芽孢菌，屬于弧菌屬，是一種常見的病原菌。是一種嗜鹽性的革蘭氏陰性菌，可以發(fā)酵葡萄糖，不產(chǎn)氣，不能利用蔗糖和乳糖，不產(chǎn)生硫化氫，氧化酶試驗呈現(xiàn)陽性，賴氨酸脫縮酶和鳥氨酸脫縮酶試驗呈現(xiàn)陽性，二精氨酸脫縮酶試驗呈現(xiàn)陰性。其主要的棲息地在海水中。如果食用了遭此菌污染的海鮮，會引發(fā)食物中毒。

二、基本信息

別名：嗜鹽菌，副溶血弧菌，副溶血性弧菌

中文學(xué)名：腸炎弧菌

拉丁學(xué)名：Vibrio Parahaemolyticus

二名法：Vibrio parahaemolyticus

界：細菌界

門：變形菌門 Proteobacteria

綱：γ-變形菌綱Gammaproteobacteria

目：弧菌目 Vibrionales

科：弧菌科 Vibrionaceae

屬：弧菌屬 Vibrio

種：副溶血弧菌 V. parahaemolyticus

簡稱：VP

三、生存環(huán)境

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)廣泛存在于海水和海產(chǎn)品中,是我國沿海地區(qū)常見的食物中毒病原菌。副溶血弧菌嗜鹽畏酸，在無鹽培養(yǎng)基上，不能生長，3%～6%食鹽水繁殖迅速，每8～9分鐘為1周期，低于0.5%或高于8%鹽水中停止生長。在食醋中1～3分鐘即死亡，加熱56℃5～10分鐘滅活，在1%鹽酸中5分鐘死亡。

四、菌株性質(zhì)

已知副溶血弧菌有12種O抗原及59種K抗原，據(jù)其發(fā)酵糖類的情況可分為5個類型。各種弧菌對人和動物均有較強的毒力，其致病物質(zhì)主要有分子量42000的致熱性溶血素(TDH)和分子量48000的TDH類似溶血毒(TRH)，具有溶血活性、腸毒素和致死作用。

副溶血性弧菌食物中毒也稱嗜鹽菌食物中毒，是進食含有該菌的食物所致，主要來自海產(chǎn)品或鹽腌漬品，常見者為蟹類、烏賊、海蜇、魚、黃泥螺等，其次為蛋品、肉類或蔬菜。臨床上以急性起病、腹痛、嘔吐、腹瀉及水樣便為主要癥狀。主要病理變化為空腸及回腸有輕度糜爛，胃粘膜炎、內(nèi)臟(肝、脾、肺)淤血等。

五、檢測方法

1、溶血性試驗

用高鹽血瓊脂培養(yǎng)基，在限定的條件下培養(yǎng)副溶血性弧菌時出現(xiàn)的溶血反應(yīng)，稱此溶血性能為“神奈川現(xiàn)象”。

此試驗要求是用人或兔的新鮮紅血球制備高鹽血平板，經(jīng)37℃、24h培養(yǎng)，如在單個菌落周圍呈現(xiàn)透明溶血環(huán)或在菌落下面有明顯溶血者，為“神奈川現(xiàn)象”陽性，若不出現(xiàn)透明溶血環(huán)或無明顯溶血者，為“神奈川現(xiàn)象”陰性。有致病性的副溶血性弧菌，多數(shù)為神奈川現(xiàn)象陽性，但亦有少數(shù)為陰性。

2、血清學(xué)試驗

副溶血性弧菌有三種抗原，即O抗原（菌體抗原），K抗原（莢膜抗原）及H抗原（鞭毛抗原），其中血清學(xué)分類上有意義的是前兩者：O抗原有13種血清群，K抗原有65種血清型。

進行副溶血性弧菌血清學(xué)鑒定時，可用O抗原分群，將18-24h的培養(yǎng)物，用3%食鹽水作成較濃的菌懸液，121℃高壓1h或100℃煮沸后，用此菌懸液進行O抗血清玻片凝集試驗，同時用無菌生理鹽水作對照，如O凝集反應(yīng)陽性時，可用不經(jīng)加熱的菌懸液進行K抗血清玻片凝集反應(yīng)分型判定。天津生物芯片公司的診斷血清產(chǎn)品覆蓋了該菌所有的O血清群及K血清型。

3、核酸擴增試驗

所有副溶血弧菌分離株都含有不耐熱溶血毒素（TLH），這種溶血素是副溶血弧菌所的，因此它的編碼基因tlh基因常被用作檢測副溶血弧菌的靶基因。而tlh并不是一個毒素基因，真正與致病相關(guān)的是副溶血弧菌的耐熱直接溶血素（TDH）和溶血相關(guān)溶血素（TRH），因此它們的編碼基因tdh、tlh基因常被用作副溶血弧菌致病性檢測的特異基因。基于此，天津生物芯片推出一系列常規(guī)PCR試劑盒及熒光PCR試劑盒。

1）常規(guī)PCR：鑒定標準是通過電泳來判斷是否有擴增的核酸片段以及擴增產(chǎn)物的大小是否正確。

2）實時熒光PCR：通過對實時熒光PCR反應(yīng)的每一個循環(huán)產(chǎn)物進行熒光信號的實時監(jiān)測來判斷分析。

4、嗜鹽性試驗

目的：副溶血弧菌具有嗜鹽性，此試驗為探究它宜生長的鹽濃度。

（1）配置胰蛋白胨水50mL，分裝到5支試管，每支試管都是9mL（配多5毫升只是怕實驗過程有損耗）

（2）在5支試管按量分別加入0%，3%，6%，8%，10%的NaCl

（3）在純培養(yǎng)的3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂中挑取單個可疑菌落分別介入上述的5支試管中

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