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本實驗是以質(zhì)體pBluescript II SK（-） 為材?，以?同限制酶作用，經(jīng)電泳分離DNA片段后，比較各DNA片段的泳動?與分子?，藉此練習(xí)限制酶的使用、電泳分析及簡?DNA限制圖譜 （restriction map） 的建?。 以DNA操作為主的各項實驗必須維持溶液與容器?受核酸分解酵素污染，因此請同學(xué)遵守以下原則并養(yǎng)成習(xí)慣：
a. 請隨時保持實驗桌的清潔。
b. 微?移液器頭及微?離心管取出后?即將蓋子蓋上。
c. 請勿用手觸摸滅過菌的微?移液器頭、微?離心管及各種容器的內(nèi)部。
d. 溶液打開后，蓋子請勿隨意置放。吸取各種溶液請使用滅過菌的微?移液器頭；Pipetman 要保持垂直，?要碰到容器壁；每次吸出溶液后，請?即將蓋子蓋上。
儀器用具：
37℃及65℃水浴或恒溫槽
藥品試劑：
質(zhì)體pBluescript II SK （-）
限制酶：BamHI, PvuII 及ScaI （濃?均為10 units/μL, Invitrogen）
10×Reaction buffer 6 （0.5 M Tris-HCl, pH 7.4; 60 mM MgCl2; 0.5 M NaCl; 0.5 M KCl）
無菌水
方法步驟：
1） 取7 支微?離心管，依下表所?體積 （單位 μL） 依序加于管壁?同位置上。
◆ 每次吸取限制酶時，請換一支新的微?移液器頭以免造成污染。
總體積為20 μL，短暫離心后，以微?移液器頭輕輕混合，#1 置冰浴中，其余各管置于37℃反應(yīng)1 h。
2） 置65℃水浴15 min 中止反應(yīng)后，移置冰浴?卻，即可進(jìn)?電泳分析。
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