一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

人腹膜間皮細(xì)胞分離自腹膜組織；腹膜是存在于高等脊椎動(dòng)物腹腔中的一層黏膜，主要由間皮細(xì)胞構(gòu)成，藉由結(jié)締組織的支持所形成的一層膜狀組織。腹膜包覆大部分腹腔內(nèi)的器官，能分泌黏液潤(rùn)濕臟器的表面，減輕臟器間的摩擦。腹腔臟器的血液、淋巴和神經(jīng)組織經(jīng)由腹膜與外界相連；腹膜也具有吸收撞擊保護(hù)內(nèi)臟的效果。腹膜(peritoneum)為全身面積配布最復(fù)雜的漿膜，由皮及少量結(jié)締組織構(gòu)成，薄而光滑，呈半透明狀。襯于腹、盆腔壁內(nèi)表面的腹膜稱為壁腹膜(parietal-peritoneum)或腹壁薄層；覆蓋腹、盆腔器表面的部分稱為臟腹膜(visceral-peritoneum)腹膜或腹膜臟層。臟腹膜與壁腹膜互相延續(xù)、移行，共同圍成不規(guī)則的潛在性腔隙，稱為腹膜腔(peritoneal-cavity)。腹膜腔是臟、壁兩層腹膜之間相互移行圍成的潛在性間隙。腹膜腔內(nèi)有少量漿液，在臟器活動(dòng)時(shí)可減少摩擦。腹膜間皮細(xì)胞屬于上皮組織中的單層扁平上皮，是覆蓋于腹膜表面的一層細(xì)胞。間皮細(xì)胞是構(gòu)成間皮的細(xì)胞，正常大小約為15-25微米，細(xì)胞常呈圓形或者卵圓形。其功用是提供潤(rùn)滑，使器官與器官、器官與胸膜與腹膜間都能得到良好的保護(hù)，不會(huì)互相磨損受傷。而間皮所生產(chǎn)的潤(rùn)滑和保護(hù)作用就是靠間皮細(xì)胞所分泌的物質(zhì)來達(dá)成，分泌物多半為細(xì)胞外基質(zhì)、玻尿酸類物質(zhì)。

二、產(chǎn)品信息

平臺(tái)編號(hào)：Bio-129779

規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞信息：HMrSV5

細(xì)胞名稱：人腹膜間皮細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2

細(xì)胞數(shù)量：1x10^6；1x10^6

保存溫度：37℃；-198℃

運(yùn)輸方式：常溫保溫運(yùn)輸；干冰運(yùn)輸

安全等級(jí)：1

用途限制：僅供科研3類

培養(yǎng)體系：DMEM高糖（HYCLONE SH30022.01)+10%FBS+1%三抗

培養(yǎng)溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡(jiǎn)介：HMrSV5取自女性供體,該細(xì)胞為自發(fā)永生化細(xì)胞系。

注釋：倍增時(shí)間42h

用途：細(xì)胞系

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）

三、細(xì)胞復(fù)蘇操作說明（針對(duì)凍存細(xì)胞）

實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái) ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，水浴鍋 ，離心機(jī)

實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，三抗

實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ，需復(fù)蘇的細(xì)胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.從液氮罐中取出凍存管 ，直接浸入 37℃溫水中 ，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。

2.從 37℃水浴中取出凍存管 ，打開蓋子 ，移液槍吸出細(xì)胞懸液 ，加到離心管并滴加 5 倍以上培養(yǎng)基并混勻。

3.操作離心 ， 調(diào)至 1000 轉(zhuǎn)/分 ，時(shí)長(zhǎng) 10 分鐘

4.棄去上清液 ，重懸離心管底部細(xì)胞沉淀 ，在 T25 培養(yǎng)瓶中加入 5-6ml 培養(yǎng)基 ，計(jì)數(shù) ，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶 ，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

5.次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

6.注意：凍存細(xì)胞建議三管一起復(fù)蘇到一個(gè) T25 培養(yǎng)瓶中

四、細(xì)胞傳代操作說明（貼壁細(xì)胞）

實(shí)驗(yàn)儀器 ：超凈工作臺(tái) ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機(jī)

實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗

實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細(xì)胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.細(xì)胞于培養(yǎng)箱中 ，愈合度達(dá)到 80% ，可進(jìn)行傳代。

2.按 T25 培養(yǎng)瓶計(jì) ，吸出培養(yǎng)基 ，并 PBS 緩沖液輕沖 3 遍 ，添加 0.25%含 EDTA 胰酶 2ml ，消 化 2min（具體時(shí)間視細(xì)胞而定），后用培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。1000r/min 離心 10 min ，棄上清 收集細(xì)胞，鋪至 2 個(gè) T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 培養(yǎng)基。

3.注意：消化時(shí)間不易過長(zhǎng)，消化前血清成分務(wù)必去除干凈，終止消化請(qǐng)用新鮮培養(yǎng)基，原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（終止消化或傳代）。

五、細(xì)胞傳代操作說明（懸浮細(xì)胞）

實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái) ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機(jī)

實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，三抗

實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ，需傳代的細(xì)胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管

實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 細(xì)胞于培養(yǎng)箱中，密度達(dá)到懸浮細(xì)胞傳代標(biāo)準(zhǔn)（沉降后可鋪滿底面），可進(jìn)行傳代。

2.按 T25 培養(yǎng)瓶計(jì)，吹打均勻，吸出培養(yǎng)基，1000r/min 離心 10 min，棄上清收集細(xì)胞，鋪至 2 個(gè)T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，各添加 7ml 培養(yǎng)基。

3.注意：原瓶培養(yǎng)基不可繼續(xù)使用（傳代）。

六、細(xì)胞凍存操作說明

實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái) ，CO2 培養(yǎng)箱 ，倒置顯微鏡 ，離心機(jī)

實(shí)驗(yàn)試劑：DMEM 培養(yǎng)基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶 ，三抗 ，DMSO

實(shí)驗(yàn)材料：T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶 ，需凍存的細(xì)胞 ，移液槍 ，槍頭 ，離心管 ，凍存管 ，記號(hào)筆

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.取待凍存的細(xì)胞（按 T25 計(jì) ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用培養(yǎng)基將細(xì)胞沖洗下來。1000r/min 離心 10min ，棄上清收集細(xì)胞。 如果是懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞 ，則可直接離心收集細(xì)胞。

2.加入 1ml 凍存液(90%FBS+10%DMSO )制成細(xì)胞懸液。

3.細(xì)胞懸液裝入 3 支凍存管中。

4.凍存管在 4℃下存放 30 min ，轉(zhuǎn)放-20℃ 1.5～2 h ，再轉(zhuǎn)人-70℃ 4-12 h 后即可轉(zhuǎn)移到液氮內(nèi)(- 196℃) ，并登記。

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