銅綠假單胞菌的性質(zhì)與用途及生產(chǎn)工藝與應用研究!
一、菌株簡介
銅綠假單胞菌(P.Aeruginosa)原稱綠膿桿菌。是假單胞菌屬的代表菌種。在自然界分布廣泛,為土壤中存在的見的細菌之一。各種水、空氣、正常人的皮膚、呼吸道和腸道等都有本菌存在。本菌是一種常見的條件致病菌,屬于非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌。
革蘭陰性桿菌,菌體細長,長短不一,有時呈球桿狀或線狀,成對或短鏈狀排列。菌體的一端有單鞭毛,在暗視野顯微鏡或相差顯微鏡下觀察可見細菌運動活潑。
本菌為專性需氧菌,生長溫度范圍25~42℃,生長溫度為25~30℃,特別是該菌在4℃不生長而在42℃可以生長的特點可用以鑒別。在血瓊脂平板上35℃培養(yǎng)18-24h,形成大而扁平、濕潤、有金屬光澤、藍綠色透明溶血環(huán)的菌落,有生姜味。
在麥康凱瓊脂平板上,可形成5種不同的菌落:
1)典型菌落:菌落形態(tài)不規(guī)則,邊緣呈傘狀伸展。
2)大腸菌樣型:菌落圓形凸起,無色透明,似大腸埃希菌。
3)粗糙型:菌落呈紐扣狀,表面粗糙,或菌落隆起邊緣扁平。
4)黏液型:菌落光滑,隆起,呈黏液裝,嵌入培養(yǎng)基中,不易挑起,似肺炎克雷伯菌菌落,但菌落成無色半透明。
5)侏儒型:生長緩慢,培養(yǎng)18h尚不見菌落,24h后才有細小菌落。
在普通培養(yǎng)基上可以生存并能產(chǎn)生水溶性的色素,如綠膿素(pyocynin)與帶熒光的水溶性熒光素(pyoverdin)等。在血平板上會有透明溶血環(huán)。
二、細菌特性
(1)形態(tài)染色革蘭陰性桿菌,菌體呈球桿狀或長絲狀,長短不一;單個、呈雙或短鏈狀排列;無芽胞,有莢膜,一端有單鞭毛,運動活潑,臨床分離株常有菌毛。
(2)培養(yǎng)特性專性需氧菌,部分菌株能在兼性厭氧環(huán)境中生長,營養(yǎng)要求不高,在普通培養(yǎng)基上生長良好,可生長溫度范圍是25℃~42℃,生長溫度35℃,4℃不生長而42℃生長是該菌的鑒別點之一。在血平板、麥康凱平板上均可形成5種不同形態(tài)的菌落:
①典型型,菌落呈灰綠色,大小不一,扁平濕潤,邊緣不規(guī)則,呈傘狀伸展,表面??梢娊饘俟鉂?;
②大腸菌樣型,菌落圓形凸起,灰白色半透明,似大腸埃希菌菌落;
③黏液型,菌落光滑凸起,呈黏液狀;
④侏儒型,細小,無光澤半透明菌落;
⑤粗糙型,菌落凸起,邊緣扁平,表面粗糙。在血平板上??梢娡该魅苎h(huán),有生姜氣味;在液體培養(yǎng)基中呈混濁生長,表面可形成菌膜,在SS瓊脂平板上,該菌經(jīng)過24h培養(yǎng)形成較小無色半透明菌落,一般不易與沙門菌和志賀菌菌落相區(qū)別,但經(jīng)48h培養(yǎng)菌落呈棕綠色。銅綠假單胞菌在普通瓊脂平板上生長時,可產(chǎn)生多種色素,主要為綠膿素(為銅綠假單胞菌特征性色素)和青膿素(熒光素),前者為藍綠色。從臨床標本分離的銅綠假單胞菌約有80%~90%產(chǎn)生綠膿素和青膿素。
(3)生化反應氧化酶陽性,在OF培養(yǎng)基上,能氧化利用葡萄糖、木糖產(chǎn)酸,精氨酸雙水解酶陽性,乙酰胺酶陽性,液化明膠,利用枸櫞酸鹽,還原硝酸鹽并產(chǎn)生氮氣,吲哚陰性。
(4)抗原構(gòu)造銅綠假單胞菌有菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原、黏液(S)抗原和菌毛抗原。O抗原有兩種成分:一種是外膜蛋白,為保護性抗原,免疫性強,具有屬特異性;另一種為脂多糖(LPS),具有型特異性,可用于細菌分型。
(5)抵抗力銅綠假單胞菌對外界因素的抵抗力比其他無芽胞菌強,在潮濕的環(huán)境中能長期生存。對干燥、紫外線有抵抗力,但對熱抵抗力不強,臨床分離菌株對多種抗生素不敏感。
三、耐藥性
銅綠假單胞菌的耐藥機制異常復雜,總括之,主要與以下因素有關:
①細菌產(chǎn)生抗菌活性酶,如β-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷鈍化酶等。
②細菌改變抗菌藥物作用的靶位,如青霉素結(jié)合蛋白(PBPs)、DNA旋轉(zhuǎn)酶等結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,從而逃避抗菌藥物的抗菌作用。
③外膜通透性降低。
④生物膜形成。
⑤主動泵出系統(tǒng);等等。
其中主動泵出系統(tǒng)在銅綠假單胞菌多重耐藥機制中起著主導作用。
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