問(wèn)題1：培養(yǎng)液pH 值變化太快可能原因（1）CO2 張力不對(duì)（2）培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊（3）NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖力不足（4）培養(yǎng)液中鹽濃度不正確（5）細(xì)菌、酵母或真菌污染建議解決方法（1）按培養(yǎng)液中NaHCO3 濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5％到10％。（2）松開(kāi)瓶蓋1/4 圈。（3）改用不依賴(lài)CO2 培養(yǎng)液。加HEPES 緩沖液至10 到25mM 終濃度。（4）在CO2 培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks 鹽配制的培養(yǎng)液。（5）丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。問(wèn)題2：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變可能原因（1）洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽，將培養(yǎng)基成分沉淀下來(lái)（2）冰凍保存培養(yǎng)液建議解決方法（1）用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后滅菌。（2）將培養(yǎng)液加熱到37℃，搖動(dòng)使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液。問(wèn)題3：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀， 同時(shí)pH 發(fā)生變化可能原因細(xì)菌或真菌污染建議解決方法丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。問(wèn)題4：培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因（1）胰蛋白酶消化過(guò)度（2）支原體污染（3）培養(yǎng)瓶瓶底不干凈（4）培養(yǎng)液pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）（5）消化液或培養(yǎng)液配制錯(cuò)誤、過(guò)期儲(chǔ)存、儲(chǔ)存不當(dāng)（6）細(xì)胞老化（如傳代前細(xì)胞已匯合導(dǎo)致失去貼附性）（7）接種細(xì)胞起始濃度太低或太高建議解決方法（1）縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度。（2）分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。（3）注意刷洗，或換用一次性塑料培養(yǎng)瓶（4）使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2（將培養(yǎng)液敞口放入培養(yǎng)箱也可）（5）重新配置消化液或培養(yǎng)液（6）啟用新的保種細(xì)胞（7）調(diào)節(jié)*接種細(xì)胞濃度問(wèn)題5：懸浮細(xì)胞成簇可能原因（1）培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子（2）支原體污染（3）蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解釋?zhuān)?）DNA污染建議解決方法（1）用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕輕吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液。（2）分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。（3）用DNase I 處理細(xì)胞。問(wèn)題6：原代細(xì)胞培養(yǎng)物污染可能原因原代培養(yǎng)組織在進(jìn)入培養(yǎng)前已污染建議解決方法培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的平衡鹽溶液反復(fù)沖洗組織。問(wèn)題7：培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢可能原因（1）由于更換不同培養(yǎng)液或血清（2）培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞。（3）培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染（4）試劑保存不當(dāng)（5）接種細(xì)胞起始濃度太低（6）細(xì)胞已老化（7）支原體污染建議解決方法（1）比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)。讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液。（2）換入新鮮配制培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子。（3）用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物?；蛴每股爻?。（4）血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養(yǎng)液需在2－8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，并在2 周內(nèi)用完。（5）增加接種細(xì)胞起始濃度。（6）換用新的保種細(xì)胞。（7）分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。問(wèn)題8：培養(yǎng)細(xì)胞死亡可能原因（1）培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2（2）培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大（3）細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷（4）培養(yǎng)液滲透壓不正確（5）培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積（6）更多原因參考問(wèn)題4和問(wèn)題7建議解決方法（1）檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2（2）檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度（3）取新的保存細(xì)胞種（4）檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓。注意：大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞能耐受滲透壓為260–350mOsm/kg。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓。（5）換入新鮮培養(yǎng)液（6）更多解決方法參考問(wèn)題4和問(wèn)題7