手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
（一） 原理
目前用于抗體標記的熒光素主要有異硫氰酸熒光素（Fluorescein isothiocynate,FITC）或羅達明（Lissamine rhodamine B200, RB200）。在鹼性條件下FITC的碳酰胺鍵可與抗體賴氨酸的ε氨基共價結合，標記后的抗體仍保持與相應抗原結合的能力。在熒光燈源紫外線或蘭紫光激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光，通過在熒光顯微鏡下觀察或流式細胞儀分析可對相應抗原進行定性、定位或定量的檢測。
免疫組化抗體
（二） 操作步驟
將純化的IgG抗體對PH9～9.5碳酸鹽緩沖液透析過夜，
透析后抗體液移入小燒杯中
↓
稱取適量IFTC，加入二甲亞砜（DMSO）（FITC～1mg/1ml DMSO）
使終濃度為1mgFITC／1mlDMSO
FITC／IgG比例:如IgG濃度為1mg／ml，F(xiàn)ITC／IgG比例約為50μgFITC／mgIgG；
如IgG為5～10mg／ml，則比例為25μgFITC／ml IgG
在10ml小燒杯中先放入抗體
↓
按上述比例將FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗體溶液中
↓
將標記物用PBS加至2.5ml，磁力攪拌器室溫下避光攪拌2h
↓
用PD10柱（Sephadex G25柱）除去游離熒光素，先用25ml PBS淋洗G25柱
↓
收集PBS洗脫*個熒光素結合蛋白峰，測定F／P
比值。第二個熒光素峰為游離熒光素
計算:
2.87×A495
F／P＝────────
A280-0.35×A495
合適的F／P值為2～4。
（三） 試劑器材
1. 純化的多克隆抗體或單克隆抗體。 免疫組化抗體
2. FITC（Fluorescein-5-Lsothiocyanalte）或其它熒光色素。
3. PBS、DMSO
4. PH9～9.5碳酸鹽緩沖液: Na2CO34.3g，NaHCO3 8.6g加蒸餾水至500ml。
5. PD10柱（Sephadex G25柱）
6. 磁力攪拌器，紫外分光光度計等
（四） 注意事項
1. FITC保存于4℃暗處，使用前待試劑瓶升至室溫時開蓋稱取，以避免潮解。
2. FITC-DMSO液要臨用時配制。
3. 碳酸鹽緩沖液要新鮮配制。
相關產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的，應在授權范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
- 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
采購中心