細菌細胞總蛋白提取試劑盒
目錄號：KAM404
試劑內(nèi)容：
試劑組成
KAM404-1（50 次） KAM404-2（100 次）
細菌細胞蛋白裂解液50ml 100 ml
細菌細胞漂洗液120 ml 2×120 ml
溶菌酶貯存液3ml 6ml
100×蛋白酶抑制劑0.6ml 1.2ml
50% 甘油10ml 20ml
說明書1 份1 份
儲存條件：
本試劑在室溫干燥條件下，可保存6 個月。溶菌酶貯存液、100×蛋白酶抑制劑和50% 甘油
2-8℃保存。
產(chǎn)品簡介
1、總論：經(jīng)典的細胞蛋白質(zhì)分離流程由下述主要步驟組成：清洗組織或細胞；裂解細胞；
離心去沉淀獲得可溶性蛋白質(zhì)粗提物（可依據(jù)目標(biāo)蛋白質(zhì)的理化特性特別的調(diào)配裂解緩沖
液）；通過有機溶劑或鹽析等沉淀離心、層析、電泳等方法進一步純化，得到目的產(chǎn)物蛋白。
2、本試劑使用溫和的非離子型去污劑，適用于大腸桿菌表達的重組蛋白的蛋白提取。本產(chǎn)
品可應(yīng)用于從細菌裂解液中提取可溶性蛋白。所提取的蛋白保持了生物學(xué)活性，可進行IP，
Western Blot，蛋白純化等下游操作。注意事項：<請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事
項>1） 若目的蛋白不穩(wěn)定，冰浴中孵育時間可以減少甚至取消，裂解液內(nèi)加入0.2 倍體積
50%甘油也可以穩(wěn)定目的蛋白。本試劑4℃保存
操作步驟：
1、離心收集細菌細胞, 按照每克濕菌取用5-6ml 細菌細胞漂洗液的比例，于20℃～37℃將
細胞懸浮起來后，4℃，12000g，1-2min 離心除去細菌細胞漂洗液，漂洗2 次。（離心只是
收集細胞，轉(zhuǎn)速、時間可自行調(diào)整。）如果細菌細胞漂洗液不夠，也可以用TE buffer（H=7.4
--7.6）代替。
2、離心除去細菌細胞漂洗液后, 按每克濕菌細胞，加入5ml 細菌細胞蛋白裂解液，250ul 溶
菌酶貯存液和50ul 100×蛋白酶抑制劑，混懸細菌細胞樣品。
3、混旋或顛倒試管幾次后，20℃～37℃溫育10～20 分鐘，同時輕輕搖動。若蛋白表達量
較低，建議結(jié)合超聲粉碎，置冰上后，采用300w，10s 超聲/10s 間隔，超聲20min，至菌
液變清或者變色。若目的蛋白不穩(wěn)定，可冰浴中孵育，且時間可以減少，裂解液內(nèi)加入0.2 倍
體積50%甘油也可以穩(wěn)定目的蛋白。
4、細胞破碎后的勻漿液，根據(jù)您不同需要可以在10 000g 離心10min 到100 000g 離心1h
范圍離心。沉淀棄去。上清即為含有目的蛋白質(zhì)的粗提物。（更多產(chǎn)品請查詢圻明網(wǎng)上商城http://www.kamingbio.com/）