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蛋白酶的底物特異性(sigma的合成底物)

來(lái)源:上海嶸崴達(dá)實(shí)業(yè)有限公司   2009年11月18日 09:01  

    

蛋白酶的底物特異性(sigma的合成底物)

問(wèn):新篩選的蛋白酶,用sigma合成底物測(cè)其底物特異性,包括lys-pNA,phe-pNA,leu-pNA,ala-nitroanilide hydrochloride,glu-nitroanilide,但都沒(méi)有顯色,就是說(shuō)沒(méi)有酶活。 難道對(duì)這些位點(diǎn)都不切割嗎?有沒(méi)有可能有其他原因?合成小肽的長(zhǎng)度對(duì)酶特異性影響大嗎?另外,有一些底物是用dmso溶解的,我的酶不耐有機(jī)溶劑,但底物只占終體積的1/10,dmso會(huì)對(duì)我的酶產(chǎn)生影響嗎?謝謝!

答:合成小肽的長(zhǎng)度對(duì)酶活的影響是的。一直在做一個(gè)三肽酶,產(chǎn)物是 N 端三肽,實(shí)驗(yàn)中只能用 Xaa-Xaa-Xaa-pNA 來(lái)測(cè)定活性,其他長(zhǎng)度一個(gè)也不行。如果這個(gè)蛋白酶是羧基肽酶,那就要與氨基肽酶連用測(cè)定活性。酶切位點(diǎn)的左右是什么性質(zhì)的氨基酸也需要注意。先做個(gè)同源比對(duì),看看類似的蛋白酶切的是什么底物。爭(zhēng)取做到心中有數(shù)。多做一些底物,如果發(fā)現(xiàn)新的zui適底物,特別是氨基酸性質(zhì)相差較遠(yuǎn)的時(shí)候,對(duì)寫文章很有利。

 

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