蛋白酶的底物特異性(sigma的合成底物)
問:新篩選的蛋白酶,用sigma合成底物測其底物特異性,包括lys-pNA,phe-pNA,leu-pNA,ala-nitroanilide hydrochloride,glu-nitroanilide,但都沒有顯色,就是說沒有酶活。 難道對這些位點都不切割嗎?有沒有可能有其他原因?合成小肽的長度對酶特異性影響大嗎?另外,有一些底物是用dmso溶解的,我的酶不耐有機(jī)溶劑,但底物只占終體積的1/10,dmso會對我的酶產(chǎn)生影響嗎?謝謝!
答:合成小肽的長度對酶活的影響是的。一直在做一個三肽酶,產(chǎn)物是 N 端三肽,實驗中只能用 Xaa-Xaa-Xaa-pNA 來測定活性,其他長度一個也不行。如果這個蛋白酶是羧基肽酶,那就要與氨基肽酶連用測定活性。酶切位點的左右是什么性質(zhì)的氨基酸也需要注意。先做個同源比對,看看類似的蛋白酶切的是什么底物。爭取做到心中有數(shù)。多做一些底物,如果發(fā)現(xiàn)新的zui適底物,特別是氨基酸性質(zhì)相差較遠(yuǎn)的時候,對寫文章很有利。
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