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葡聚糖凝膠使用說明書

來源:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司   2013年03月05日 16:00  

葡聚糖凝膠 LH-20

適合用于有機溶劑分離嗜脂性分子,天然產(chǎn)物在有機溶劑中的純化??梢苑浅=?jīng)濟的大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物,尤其在中藥有效成分提取中作為大孔吸附樹脂解析物的純化。 結(jié)合凝膠過濾﹑分配色譜及吸附層析于一身,能分離結(jié)構(gòu)相近的分子。因此使用中要考略幾種色譜的作用機制。

zui高載量可達(dá)250mg樣品/ml凝膠﹑極少需要再生﹑使用得當(dāng),分離效果可保持不變。

上樣量視被分離物的結(jié)構(gòu)性能的差異而定:差異大,則大;差異小,則小。凝膠過濾的上樣量一般為5-7%的床體積,我們建議初次上樣量控制在1-2%的床體積,視分離情況可以逐步增加;柱高的選擇也與分離要求相關(guān)——難分物質(zhì)要有一定柱高和流速控制;流動相可參考TLC的條件,正確的流動相可以提高分離度并縮短分離時間。

流動相的常用溶劑為:水、甲醇、乙酸乙酯、

上述溶劑的極性依次降低,對帶有極性的被分離物而言,保留值和分離度依次遞增;同理選用的凝膠柱高可依次降低,流速可以增大(或上樣量可以增加,樹脂體積在低極性溶劑中明顯收縮)。

溶劑的溶解性,極性,沸點,毒性都是要考慮到的,二氯甲烷通常對被分離物質(zhì)間的極性和堿性差異比較小時采用。甲醇通常對帶環(huán)狀包括苯環(huán)物質(zhì)分離采用,葡聚糖凝膠對環(huán)狀物質(zhì)有強烈吸附。LH-20同時具備親水和親脂雙重性質(zhì),且被分離物質(zhì)的極性在分離過程中起著重要作用。

1 葡聚糖凝膠LH-20的原理

葡聚糖凝膠LH-20的分離原理主要有兩方面:以凝膠過濾作用為主,兼具反相分配的作用(在反相溶劑中)。因為凝膠過濾作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脫下來,小分子的化合物保留強,zui后出柱。如果使用反相溶劑洗脫,葡聚糖凝膠LH-20對化合物還起反相分配的作用,所以極性大的化合物保留弱,先被洗脫下來,極性小的化合物保留強,后出柱。如果使用正相溶劑洗脫,這主要靠凝膠過濾作用來分離。

2 葡聚糖凝膠LH-20洗脫溶劑

葡聚糖凝膠 LH-20 洗脫溶劑分為兩類:反相和正相兩種。用得zui多的是反相溶劑洗脫,以甲醇——水系統(tǒng)zui為常見,先用水,逐漸增加甲醇比例,zui后用100%甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯(仿)——甲醇zui為常見,先用50%氯(仿)——甲醇,逐漸增加甲醇比例,zui后用100%甲醇沖柱。

3 樣品的處理和洗脫溶劑的選擇

如果樣品極性大,選用反相溶劑洗脫(甲醇——水),樣品用zui少體積的甲醇——水(盡可能甲醇少一些)溶解,過濾后,濕法上樣(必須要進(jìn)行過濾!否則把葡聚糖凝膠LH-20 堵塞,就必須將葡聚糖凝膠LH-20的柱頭部分棄去,造成不必要的浪費)。如果樣品極性小,這選用正相溶劑洗脫(氯(仿)——甲醇),樣品用zui少體積的氯(仿)——甲醇溶解,過濾后,濕法上樣。

4 葡聚糖凝膠 LH-20的使用方法

將干粉浸泡于60-70%乙醇中過夜(充分?jǐn)嚢瑁慈タ赡艽嬖诘臍埩粑?,抽干然后濕態(tài)不間隙裝柱,不能出現(xiàn)凝膠斷層(否則要重新裝柱),動態(tài)用一倍柱體積的60-70%乙醇淋洗,再用水洗凈乙醇即根據(jù)自己選用洗脫液平衡層析柱至少兩個柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止,如改變?nèi)軇?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì),并根據(jù)性質(zhì)確定柱高。如使用相同的溶劑,在以后的層析中柱平衡可以省略。

1 選擇條件:

梯度洗脫在葡聚糖凝膠 LH-20使用中并不象在正相柱層析中那么重要。首先你的樣品須要能溶解在盡量少量的洗脫劑中。極性在的用甲醇水系統(tǒng);極性小者一般用不含水的系統(tǒng),常用正己烷(二氯)甲烷甲醇系統(tǒng)。

2飽和層析柱:

用洗脫劑將凝膠搖勻,直立柱身,讓其自然沉降,此時要防止氣泡留在其中。至少半小時打開開關(guān),流出幾個柱體種的洗脫劑,目的是使其膨脹在正確比例的洗脫劑中。

3樣品處理:

用盡量少的洗脫劑溶解樣品,常壓過濾。

4)濕法上柱:

這也是要有技巧的步驟。
   
5洗脫:

控制流速,一般1drop/s以下,可參見廠家的一些參數(shù);必要時更改極性(很多時一個極性就可以將樣品洗脫完畢)。

6再生以備下次使用。

 

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