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●取材和固定： 處死動(dòng)物后立即切取組織塊，并快速投入固定液中。
●脫水和透明：
８０％酒精（min）
９５％酒精Ⅰ（min）
９５％酒精Ⅱ（min）
*Ⅰ（min）
*Ⅱ（min）
二甲苯Ⅰ、Ⅱ（min）
<2mm
45-60
45-60
45-60
15-30
2-4mm
60-120
60-120
60-120
30
4-5mm
120-240
120-240
120-240
60
注意事項(xiàng)：1.脫水應(yīng)*，否則材料不能透明，影響石蠟的浸入，致使難以切片。
2.在低濃度或純酒精中，每級(jí)停留不宜太長，否則易使組織變軟，助長材料的解體。
3.在高濃度或純酒精中，每級(jí)停留的時(shí)間也不宜太長，否則會(huì)使組織變脆，影響切片。
4.如需過夜，應(yīng)停留在70%酒精中。
5.使用透明劑時(shí)，要隨時(shí)蓋緊蓋子，以免空氣中的水分進(jìn)入。
●
浸蠟和包埋：
浸蠟：將透明的組織放入蠟杯（Ⅰ）→蠟杯（Ⅱ）→蠟杯（Ⅲ）。浸蠟時(shí)間視材料大小而定，一般總的浸蠟時(shí)間為２－４小時(shí)左右。
包埋：1. 組織浸入石蠟后，包埋前將組織移入包埋用石蠟杯內(nèi)。從恒溫箱取出置于三角架上，其下點(diǎn)燃酒精燈，以保持石蠟的溶解狀態(tài)。
2.準(zhǔn)備好包埋框，將包埋用的鑷子在酒精燈上加溫（防止鑷子粘蠟）后，左手持蠟杯，右手把加溫的鑷子放在蠟口（直立狀）倒蠟時(shí)讓石蠟沿鑷子注入包埋框內(nèi)。
3.迅速鑷取組織塊放入包埋框石蠟內(nèi)，切面朝下放正置入框底并輕輕壓平，以保證不再有氣泡。
4.待石蠟表面凝固前將標(biāo)簽貼于其上，需注意勿使標(biāo)簽與標(biāo)本混淆，當(dāng)蠟塊冷至蠟面有透明蠟?zāi)r(shí)，浸入冷水中迅速使其冷卻，否則蠟內(nèi)常形成結(jié)晶。
5.蠟塊*硬固后除去銅框，以保證蠟*凝固，立即修切，準(zhǔn)備制成切片或儲(chǔ)藏備用。
●切片制作：
注意事項(xiàng)： 1.室溫過高時(shí)，可將修好的蠟塊放到冰箱中冷卻一定時(shí)間。在夏季時(shí)可用冰塊冷卻刀和組織塊，減少刀與組織塊在過程中產(chǎn)生的熱時(shí)，使石蠟保持合適的硬度以利于切片。
2.切片經(jīng)30%的乙醇初展后，再用載玻片撈起蠟帶放入展片儀水盒內(nèi)（一般水溫為45℃左右）。待蠟片帶中的組織展平后，即可進(jìn)行分片和撈片。
3. 切片時(shí)要及時(shí)清潔刀口、除去蠟屑，否則易引起破碎。
●貼片：
待切片在恒溫水內(nèi)充分?jǐn)傞_展平后，將載玻片垂直插入水中以毛面輕靠切片，并用毛筆將切片一邊撥于玻片上，隨即將玻片直立提起?？欤?/span>
●
烘片與脫蠟：
石蠟切片在90度烘箱內(nèi)烘半小時(shí)
經(jīng)二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟各5-10min，然后放入100%、95%、90%、80%、70%等各級(jí)酒精溶液中各3-5min，再放入蒸餾水中3min。
●染色
1.將蒸餾水洗滌后的切片移入Harris蘇木精液中５－１０min，使細(xì)胞核著色。
2.用自來水洗去切片上殘余的染液。
3.將切片放入1%鹽酸乙醇液（鹽酸1份+70%乙醇100份）中褪色，見切片變紅，顏色較淺即可，約數(shù)秒至數(shù)十秒鐘。
4.入１％氨水或自來水浸洗，使之返藍(lán)。
5.在蒸餾水中浸片刻。
6.０.５％伊紅酒精溶液中染色２－５min，使細(xì)胞質(zhì)著色。
●脫水和透明：：
切片依次入９５％酒精（Ⅰ）→９５％酒精（Ⅱ）→*（Ⅰ）→*（Ⅱ）
→１：１*、二甲苯→二甲苯（Ⅰ）→二甲苯（Ⅱ），各級(jí)中停留１－５min。
●封藏：
將切片從二甲苯（Ⅱ）中取出，用紙或布擦去材料周圍的二甲苯。在材料中央滴一小滴樹膠，然后，用鑷子加蓋蓋玻片。切片封好后，放在切片托盤上待干燥，即可用于觀察。
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