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系列SABC試劑盒使用說明書
TNFα免疫組化染色試劑盒
產(chǎn)品編號：SA 2041
保存：4℃冷藏
有效期：一年
工作原理：
TNFα是腫瘤壞死因子α抗原，該蛋白和誘導(dǎo)細(xì)胞的快速死亡有關(guān)。
抗體：兔抗TNFα抗原，親和純化抗體。
適宜種屬：人、大鼠、小鼠組織。
標(biāo)本處理：細(xì)胞涂片，冰凍和石蠟切片。
染色模式：細(xì)胞漿。
試劑盒內(nèi)容：
1．5％BSA封閉液2ml或5ml，組織切片的封閉。
2．兔抗TNFα抗原2ml或5ml。
3．生物素化山羊抗兔IgG，2ml或5ml。
4．SABC，2ml或5ml。鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物。
5．陽性對照片1-2張。
用戶自備試劑：
1.APES或POLY-L-LYSINE（有售）。
2.PBS（Ph7.2-7.6）配法：1000ml蒸餾水中加氯化鈉9g，Na2HPO4.12H2O 6g，Na2HPO4.2H2O 0.4g。
3.DAB顯色試劑盒（有售）。
石蠟切片微波修復(fù)抗原染色程序：
1． 載玻片防脫片劑處理：可選擇APES或POLY-L-LYSINE。撈片后置烤箱60℃ 30-60分鐘以使切片緊密粘附。
2． 切片脫臘至水。
3． 30％H2O2 1份+蒸餾水10份混合，室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。
4． 滴加5％BSA封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體，不洗，
5． 滴加兔抗TNFα抗體，37℃ 1-2小時或4℃過夜。PBS（pH7.2-7.6）洗2分鐘3次。
6． 滴加生物素化山羊抗兔IgG，20-37℃ 20分鐘。PBS（pH7.2-7.6）洗2分鐘3次。
7． 滴加試劑SABC,20-37℃ 20分鐘。PBS（pH7.2-7.6）洗5分鐘4次。
8． DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒（AR1022）。取1ml蒸餾水，加試劑盒中A,B,C試劑各1滴，混勻后加至切片。室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時間，一般5-30分鐘。蒸餾水洗滌。
9． 蘇木素輕度復(fù)染。脫水，透明，封片。顯微鏡觀察。
血涂片，培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片染色程序：
1． 載玻片經(jīng)防脫片劑處理（POLY-L-LYSINE）。
2． 抗凝血經(jīng)分層離心后涂片；培養(yǎng)細(xì)胞也可涂片或貼片生長；切片室溫風(fēng)扇吹干。
3． 固定方案4％多聚甲醛或10％福爾馬林固定30分鐘；對不能耐受甲醛固定的抗原，純丙酮室溫固定30分鐘。蒸溜水洗。（干燥后可冰凍保存）。
4． 30％H202 1份+純甲醇50份混合，室溫浸泡30分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化酶。蒸餾水洗。
5． 其余步驟和石蠟切片4-9步相同。
結(jié)果：陽性細(xì)胞漿著色呈棕黃色。
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