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陰性結(jié)果常見原因
① 確認是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。
② 確認所有的試劑是否按正確的順序滴加，是否孵育了足夠的時間。
③ 對照抗體的標簽確認是否使用了正確的抗體，以及所用的檢測系統(tǒng)是否和一抗匹配。如，一抗是兔來源，一定要用抗兔的二抗來匹配；或一抗是羊來源，必須用抗羊的二抗來匹配。
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液是否正確。一抗的稀釋液不能用來稀釋二抗。
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件，尤其是標記了酶或熒光素的抗體。不要與揮發(fā)性有機溶劑一起保存，以免降低抗體的效價。要求冷凍保存的抗體，盡量避免反復凍融。
⑥ 檢查標本的儲存條件，用已知陽性的標本做陽性對照。
⑦ 檢查色原/底物溶液，zui簡單的檢測方法是將一滴標記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中，如果底物發(fā)生預(yù)期的顏色變化，則可排除底物的因素。需要注意的是，有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時間內(nèi)用完，否則會失效。
⑧ 檢查復染劑和封片劑和所使用的顯色劑是否匹配。
⑨ 檢查抗原處理方式是否正確，有些不正確的處理方式會破壞染色。如：Collge Ⅳ只能用酶消化，熱修復會破壞染色。
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