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陰性結(jié)果常見原因
① 確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。
② 確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序滴加，是否孵育了足夠的時(shí)間。
③ 對照抗體的標(biāo)簽確認(rèn)是否使用了正確的抗體，以及所用的檢測系統(tǒng)是否和一抗匹配。如，一抗是兔來源，一定要用抗兔的二抗來匹配；或一抗是羊來源，必須用抗羊的二抗來匹配。
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液是否正確。一抗的稀釋液不能用來稀釋二抗。
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件，尤其是標(biāo)記了酶或熒光素的抗體。不要與揮發(fā)性有機(jī)溶劑一起保存，以免降低抗體的效價(jià)。要求冷凍保存的抗體，盡量避免反復(fù)凍融。
⑥ 檢查標(biāo)本的儲存條件，用已知陽性的標(biāo)本做陽性對照。
⑦ 檢查色原/底物溶液，zui簡單的檢測方法是將一滴標(biāo)記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中，如果底物發(fā)生預(yù)期的顏色變化，則可排除底物的因素。需要注意的是，有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時(shí)間內(nèi)用完，否則會失效。
⑧ 檢查復(fù)染劑和封片劑和所使用的顯色劑是否匹配。
⑨ 檢查抗原處理方式是否正確，有些不正確的處理方式會破壞染色。如：Collge Ⅳ只能用酶消化，熱修復(fù)會破壞染色。
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