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細胞固定的幾種方法

來源:北京索萊寶科技有限公司   2013年05月23日 14:28  

 固定液選擇的標準:

1)好地保持細胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu);

2)大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金屬的固定液在免疫組化和細胞化學技術(shù)中是禁用的;

3)不要用可能帶有自發(fā)熒光的固定劑,如帶有苦味酸的固定劑,還有甲醛升汞固定液,會使上皮細胞產(chǎn)生非特異性熒光;

4)固定劑的選擇、固定時間、溫度和PH值都會影響實驗結(jié)果。

 

常用的幾種固定液:

14%中性甲醛固定液:能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作(Job)。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的,其固定效果及對組織抗原性的保存均優(yōu)于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處,保存時間不超過一個月。

甲醛(40% 100ml

無水磷酸氫二鈉 6.5g

磷酸二氫鈉 4.0g

蒸餾水 900ml

2)乙醇固定液:使用時以80%-95%的濃度為宜,具有硬化、固定、脫水等作用,對組織滲透力較弱,因此很少單獨使用,但其保存組織中的核酸強于中性甲醛,故常用于有核酸操作的實驗或檢查,假如用于證實尿酸結(jié)晶和保存糖原,可用于100%乙醇固定組織。

34%多聚甲醛固定液:主要用于培養(yǎng)細胞的固定。

 

混合固定液

1)乙醇-甲醛(乙醇-福爾馬林,AF)固定液:適用于皮下組織中肥大細胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用,固定后的標本可直接入95%乙醇脫水。

甲醛(40% 100ml

95%乙醇 900ml

2B5(醋酸鈉-升汞-甲醛)固定液:多用于固定淋巴組織。染色前應(yīng)進行脫汞沉淀處理。

無水醋酸鈉 1.25g

升汞 6.0g

蒸餾水 90ml

使用前加入甲醛 10ml

3Bouin固定液:非凡適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對組織固定較均勻,收縮很少,不會使組織變硬變脆。需現(xiàn)配現(xiàn)用。

飽和苦味酸水溶液(約1.22% 75ml

甲醛 25ml

冰醋酸 5ml

4Carnoy固定液:穿透能力強,可很好的固定細胞質(zhì)和細胞核,非凡適用于固定外膜致密的組織,也適用于糖原及尼氏小體的固定。

5 Zenker固定液:經(jīng)此液固定的標本,細胞核和細胞質(zhì)染色頗為清楚,但成本較高且需非凡處理汞。該固定液要避免接觸陽光,以免引起化學變化而失效。

 

北京索萊寶科技有限公司 

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