一、實驗方法
Cometro液相色譜系統(tǒng);
色譜柱:Comasil C18 250*4.6mm,5μm;
流動相:甲醇-水=40:60;
紫外檢測器波長:283nm;
流速:1.0ml/min;
樣品:柚皮苷對照品(19.68μg/ml),樣品;
進樣量:對照品分別進樣2.5μl、4μl、5μl、6μl、7.5μl各5次,樣品進樣5μl,使樣品與標準品5:1混合再進樣5μl,考察線性相關性,保留時間重現性,峰面積重現性,回收率。
二、實驗結果與分析
1、對照品5μl
Channel A Results | |||||
Name | Retention Time | Area | Theoretical plates (USP) | Resolution (USP) | Asymmetry |
柚皮苷 | 18.477 | 89103 | 8137 | 0.00000 | 1.09209 |
附進樣量,保留時間,峰面積關系表:
進樣量/μl | 保留時間/min | 峰面積/mV*min |
2.5 | 18.386 | 42387 |
4 | 18.377 | 71244 |
5 | 18.477 | 89103 |
6 | 18.539 | 106504 |
7.5 | 18.501 | 134769 |
2、樣品5μl
Channel A Results | |||||
Name | Retention Time | Area | Theoretical plates (USP) | Resolution (USP) | Asymmetry |
柚皮苷 | 19.497 | 128002 | 8087 | 5.22515 | 1.05546 |
3、樣品與標準5:1混合后進樣5μl
Channel A Results | |||||
Name | Retention Time | Area | Theoretical plates (USP) | Resolution (USP) | Asymmetry |
柚皮苷 | 18.535 | 120336 | 7828 | 2.87114 | 1.03257 |
三、結果運算
1、保留時間重現性考察
保留時間 | 18.386 | 18.377 | 18.477 | 18.539 | 18.501 |
RSD | 0.3747% |
2、峰面積重現性考察
峰面積 | 89103 | 89105 | 88953 |
RSD | 0.0979% |
3、線性相關性考察及樣品含量計算
以進樣量為橫坐標,峰面積為縱坐標,得線性方程:
由此可算出樣品含柚皮苷28.08μg/ml。
4、回收率考察:
根據上面線性方程可算出混合后樣品含柚皮苷26.43μg/ml,而實際真值是26.68μg/ml,因此得回收率為99.06%。
四、綜述
此四項考察綜合考察了檢測器的吸收穩(wěn)定性,泵的流量性,進樣閥、進樣針的性,Comasil色譜柱的性。
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