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血球計數(shù)板的使用方法

來源:上海乾思生物科技有限公司   2013年07月12日 15:26  
      血球計數(shù)板被用以對人體內(nèi)紅、白血球進行顯微計數(shù)之用,也常用于計算一些細菌、真菌、酵母等微生物的數(shù)量,是一種常見的生物學(xué)工具。
如何使用血球計數(shù)板。以下做了7點說明:
1.視待測菌懸液濃度,加無菌水適當(dāng)稀釋(斜面一般稀釋100倍),以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。
2.取潔凈的血球計數(shù)板一塊,在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。
3.將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū),勿使氣泡產(chǎn)生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數(shù)區(qū)上(不要使計數(shù)區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計數(shù)區(qū)深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)。
4.靜置片刻,使細胞沉降到計數(shù)板上,不再隨液體漂移。將血球計數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn),先在低倍鏡下找到計數(shù)區(qū)后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計數(shù)。由于生活細胞的折光率和水的折光率相近,觀察時應(yīng)減弱光照的強度。
5.計數(shù)時若計數(shù)區(qū)是由16個中方格組成,按對角線方位,數(shù)左上、左下、右上、右下的4個大方格(即100小格)的菌數(shù)。如果是25個中方格組成的計數(shù)區(qū),除數(shù)上述四個大方格外,還需數(shù)中央1個大方格的菌數(shù)(即80個小格)。為了保證計數(shù)的準(zhǔn)確性,避免重復(fù)計數(shù)和漏記,在計數(shù)時,對沉降在格線上的細胞的統(tǒng)計應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上,計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線,以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細胞計入本格,本格的下線和右線上的細胞按規(guī)定計入相應(yīng)的格中。見右圖:即本格中計數(shù)細胞為3個.
6.對于出芽的酵母菌,芽體達到母細胞大小一半時,即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復(fù)計數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)相差過大,否則應(yīng)重新操作),按公式計算出每mL(g)菌懸液所含細胞數(shù)量。
7.測數(shù)完畢,取下蓋玻片,用水將血球計數(shù)板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機吹干,放入盒內(nèi)保存。

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