計算規(guī)則
血細胞計數(shù)的誤差分別來源于技術誤差和固有誤差。其中由于操作人員采血不順利,器材處理、使用不當,稀釋不準確,細胞識別錯誤等因素所造成的誤差屬技術誤差;而由于儀器(計數(shù)板、蓋片、吸管等)不夠準確與精密帶來的誤差稱儀器誤差,由于細胞分布不均勻等因素帶來的細胞計數(shù)誤差屬于分布誤差或計數(shù)域誤差(filederror)。儀器誤差和分布誤差統(tǒng)稱為固有誤差或系統(tǒng)誤差。技術誤差和儀器誤差可通過規(guī)范操作、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正,但細胞分布誤差卻難于*消除。因此,搞好紅細胞計數(shù)的質(zhì)量控制一般需采用以下措施。
1.避免技術誤差,糾正儀器誤差
(1)所用器材均應清潔干燥,計數(shù)板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應符合要求或經(jīng)過校正。①計數(shù)板的鑒定:要求計數(shù)室的臺面光滑、透明,劃線清晰,計數(shù)室劃線面積準確。必要時采用嚴格校正的目鏡測微計測量計數(shù)室的邊長與底面積,用微米千分尺測量計數(shù)室的深度。美國國家標準局(NBS)規(guī)定每個大方格邊長的誤差應小于1%,即1±0.01mm,深度誤差應小于2%,即0.1±0.002mm。若超過上述標準,應棄之不用。②血蓋片應具有一定的重量,平整、光滑、無裂痕,厚薄均勻一致,可使用卡尺多點測量(至少在9個點),不均勻度在0.002mm之內(nèi)。必要時采用平面平行儀進行測量與評價,要求呈現(xiàn)密集平行的直線干涉條紋。zui簡單的評價方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上,若能吸附一定的時間不脫落,落下時呈弧線形旋轉(zhuǎn),表示蓋片平整、厚薄均勻。同時,合格的蓋片放置在計數(shù)室表面后,與支持柱緊密接觸的部位可見到彩虹。精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后,在掠射光線下觀察,如見到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質(zhì)量也符合要求。③目前臨床實驗室多采用一次性微量采血管采集毛細血管血,除注意定點購買使用信譽較好廠家的產(chǎn)品外,還應對每一批量的采血管進行抽樣檢查,可通過水銀稱重法或有色溶液比色法進行校正,誤差不應超過±1%。
(2)紅細胞稀釋液應等滲、新鮮、無雜質(zhì)微粒。
(3)嚴格操作,從消毒、采血、稀釋、充池到計數(shù)都應規(guī)范,尤其應注意的是血樣稀釋及充池時既要作到充分混勻,又要防止劇烈震蕩為破壞紅細胞。必須一次性充滿計數(shù)室,防止產(chǎn)生氣泡,充入細胞懸液的量以不超過計數(shù)室臺面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜。
(4)報告法定計量單位。
2.縮小計數(shù)域誤差及分布誤差
縮小計數(shù)域誤差或分布誤差由于血細胞在充入計數(shù)室后呈隨機分布或稱Poisson分布(),而我們所能計數(shù)的細胞分布范圍是有限的,由此造成的計數(shù)誤差稱為計數(shù)域誤差或分布誤差??s小這種誤差的有效方法就是盡量擴大細胞計數(shù)范圍和計數(shù)數(shù)目,一般**行誤差估計,然后決定所需計數(shù)的數(shù)目和計數(shù)范圍,只要能將誤差控制在允許范圍內(nèi)即可。Berkson指出,當使用同一支吸管、同一面計數(shù)室,計數(shù)0.2mm2面積的細胞數(shù),有望將CV控制在可接受的7%以內(nèi)。對于紅細胞計數(shù)而言,由于紅細胞數(shù)量較多,在計數(shù)室中顯得比較“擁擠”,根據(jù)Poisson公式推斷。欲將誤差控制在變異百分數(shù)5%以內(nèi),至少需要在計數(shù)室中計數(shù)400個紅細胞,因此要求計數(shù)五個中方格的紅細胞。事實上Berkson還通過實驗證明,紅細胞的計數(shù)域誤差為s=0.92,較理論誤差(Poisson分布誤差)要小。
3.降低異常標本的干擾誤差
排除異常標本的干擾白細胞數(shù)量在正常范圍時,相對于紅細胞數(shù)量來講,其影響可忽略,但如白細胞過高(>100×109/L),則應對計數(shù)結(jié)果進行校正。方法是:①實際RBC=計得RBC-WBC。如當紅細胞換算后為3.5×1012/L、白細胞換算后為100×109/L時,病人實際紅細胞數(shù)應為3.4×1012/L。②在高倍鏡下計數(shù)時,避開有核細胞。有核細胞體積比正常紅細胞大,中央無凹陷,無草黃色折光,可隱約見到細胞核。此外,當病人急性嚴重貧血時網(wǎng)織紅細胞可提前大量釋放,也給紅細胞計數(shù)帶來一定的干擾,而且影響網(wǎng)織紅細胞值計算結(jié)果。其校正方法有待探討。
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