計算規(guī)則

   血細胞計數(shù)的誤差分別來源于技術誤差和固有誤差。其中由于操作人員采血不順利，器材處理、使用不當，稀釋不準確，細胞識別錯誤等因素所造成的誤差屬技術誤差；而由于儀器（計數(shù)板、蓋片、吸管等）不夠準確與精密帶來的誤差稱儀器誤差，由于細胞分布不均勻等因素帶來的細胞計數(shù)誤差屬于分布誤差或計數(shù)域誤差（filederror）。儀器誤差和分布誤差統(tǒng)稱為固有誤差或系統(tǒng)誤差。技術誤差和儀器誤差可通過規(guī)范操作、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正，但細胞分布誤差卻難于*消除。因此，搞好紅細胞計數(shù)的質量控制一般需采用以下措施。

 

1．避免技術誤差，糾正儀器誤差

（1）所用器材均應清潔干燥，計數(shù)板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應符合要求或經(jīng)過校正。①計數(shù)板的鑒定：要求計數(shù)室的臺面光滑、透明，劃線清晰，計數(shù)室劃線面積準確。必要時采用嚴格校正的目鏡測微計測量計數(shù)室的邊長與底面積，用微米千分尺測量計數(shù)室的深度。美國國家標準局（NBS）規(guī)定每個大方格邊長的誤差應小于1%，即1±0.01mm，深度誤差應小于2%，即0.1±0.002mm。若超過上述標準，應棄之不用。②血蓋片應具有一定的重量，平整、光滑、無裂痕，厚薄均勻一致，可使用卡尺多點測量（至少在9個點），不均勻度在0.002mm之內。必要時采用平面平行儀進行測量與評價，要求呈現(xiàn)密集平行的直線干涉條紋。zui簡單的評價方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上，若能吸附一定的時間不脫落，落下時呈弧線形旋轉，表示蓋片平整、厚薄均勻。同時，合格的蓋片放置在計數(shù)室表面后，與支持柱緊密接觸的部位可見到彩虹。精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后，在掠射光線下觀察，如見到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質量也符合要求。③目前臨床實驗室多采用一次性微量采血管采集毛細血管血，除注意定點購買使用信譽較好廠家的產品外，還應對每一批量的采血管進行抽樣檢查，可通過水銀稱重法或有色溶液比色法進行校正，誤差不應超過±1%。

（2）紅細胞稀釋液應等滲、新鮮、無雜質微粒。

（3）嚴格操作，從消毒、采血、稀釋、充池到計數(shù)都應規(guī)范，尤其應注意的是血樣稀釋及充池時既要作到充分混勻，又要防止劇烈震蕩為破壞紅細胞。必須一次性充滿計數(shù)室，防止產生氣泡，充入細胞懸液的量以不超過計數(shù)室臺面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜。

（4）報告法定計量單位。

 

2．縮小計數(shù)域誤差及分布誤差

　　縮小計數(shù)域誤差或分布誤差由于血細胞在充入計數(shù)室后呈隨機分布或稱Poisson分布（），而我們所能計數(shù)的細胞分布范圍是有限的，由此造成的計數(shù)誤差稱為計數(shù)域誤差或分布誤差。縮小這種誤差的有效方法就是盡量擴大細胞計數(shù)范圍和計數(shù)數(shù)目，一般**行誤差估計，然后決定所需計數(shù)的數(shù)目和計數(shù)范圍，只要能將誤差控制在允許范圍內即可。Berkson指出，當使用同一支吸管、同一面計數(shù)室，計數(shù)0.2mm2面積的細胞數(shù)，有望將CV控制在可接受的7%以內。對于紅細胞計數(shù)而言，由于紅細胞數(shù)量較多，在計數(shù)室中顯得比較“擁擠”，根據(jù)Poisson公式推斷。欲將誤差控制在變異百分數(shù)5%以內，至少需要在計數(shù)室中計數(shù)400個紅細胞，因此要求計數(shù)五個中方格的紅細胞。事實上Berkson還通過實驗證明，紅細胞的計數(shù)域誤差為s=0.92，較理論誤差（Poisson分布誤差）要小。

 

3．降低異常標本的干擾誤差

　　排除異常標本的干擾白細胞數(shù)量在正常范圍時，相對于紅細胞數(shù)量來講，其影響可忽略，但如白細胞過高（>100×109/L），則應對計數(shù)結果進行校正。方法是：①實際RBC=計得RBC-WBC。如當紅細胞換算后為3.5×1012/L、白細胞換算后為100×109/L時，病人實際紅細胞數(shù)應為3.4×1012/L。②在高倍鏡下計數(shù)時，避開有核細胞。有核細胞體積比正常紅細胞大，中央無凹陷，無草黃色折光，可隱約見到細胞核。此外，當病人急性嚴重貧血時網(wǎng)織紅細胞可提前大量釋放，也給紅細胞計數(shù)帶來一定的干擾，而且影響網(wǎng)織紅細胞值計算結果。其校正方法有待探討。