計(jì)算規(guī)則

   血細(xì)胞計(jì)數(shù)的誤差分別來源于技術(shù)誤差和固有誤差。其中由于操作人員采血不順利，器材處理、使用不當(dāng)，稀釋不準(zhǔn)確，細(xì)胞識別錯誤等因素所造成的誤差屬技術(shù)誤差；而由于儀器（計(jì)數(shù)板、蓋片、吸管等）不夠準(zhǔn)確與精密帶來的誤差稱儀器誤差，由于細(xì)胞分布不均勻等因素帶來的細(xì)胞計(jì)數(shù)誤差屬于分布誤差或計(jì)數(shù)域誤差（filederror）。儀器誤差和分布誤差統(tǒng)稱為固有誤差或系統(tǒng)誤差。技術(shù)誤差和儀器誤差可通過規(guī)范操作、提高熟練程度和校正儀器而避免或糾正，但細(xì)胞分布誤差卻難于*消除。因此，搞好紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的質(zhì)量控制一般需采用以下措施。

 

1．避免技術(shù)誤差，糾正儀器誤差

（1）所用器材均應(yīng)清潔干燥，計(jì)數(shù)板、血蓋片、微量吸管及刻度吸管的規(guī)格應(yīng)符合要求或經(jīng)過校正。①計(jì)數(shù)板的鑒定：要求計(jì)數(shù)室的臺面光滑、透明，劃線清晰，計(jì)數(shù)室劃線面積準(zhǔn)確。必要時采用嚴(yán)格校正的目鏡測微計(jì)測量計(jì)數(shù)室的邊長與底面積，用微米千分尺測量計(jì)數(shù)室的深度。美國國家標(biāo)準(zhǔn)局（NBS）規(guī)定每個大方格邊長的誤差應(yīng)小于1%，即1±0.01mm，深度誤差應(yīng)小于2%，即0.1±0.002mm。若超過上述標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)棄之不用。②血蓋片應(yīng)具有一定的重量，平整、光滑、無裂痕，厚薄均勻一致，可使用卡尺多點(diǎn)測量（至少在9個點(diǎn)），不均勻度在0.002mm之內(nèi)。必要時采用平面平行儀進(jìn)行測量與評價，要求呈現(xiàn)密集平行的直線干涉條紋。zui簡單的評價方法是將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上，若能吸附一定的時間不脫落，落下時呈弧線形旋轉(zhuǎn)，表示蓋片平整、厚薄均勻。同時，合格的蓋片放置在計(jì)數(shù)室表面后，與支持柱緊密接觸的部位可見到彩虹。精選出的蓋片與其他蓋片緊密重合后，在掠射光線下觀察，如見到完整平行的彩虹條紋表示另一枚蓋片質(zhì)量也符合要求。③目前臨床實(shí)驗(yàn)室多采用一次性微量采血管采集毛細(xì)血管血，除注意定點(diǎn)購買使用信譽(yù)較好廠家的產(chǎn)品外，還應(yīng)對每一批量的采血管進(jìn)行抽樣檢查，可通過水銀稱重法或有色溶液比色法進(jìn)行校正，誤差不應(yīng)超過±1%。

（2）紅細(xì)胞稀釋液應(yīng)等滲、新鮮、無雜質(zhì)微粒。

（3）嚴(yán)格操作，從消毒、采血、稀釋、充池到計(jì)數(shù)都應(yīng)規(guī)范，尤其應(yīng)注意的是血樣稀釋及充池時既要作到充分混勻，又要防止劇烈震蕩為破壞紅細(xì)胞。必須一次性充滿計(jì)數(shù)室，防止產(chǎn)生氣泡，充入細(xì)胞懸液的量以不超過計(jì)數(shù)室臺面與血蓋片之間的矩形邊緣為宜。

（4）報告法定計(jì)量單位。

 

2．縮小計(jì)數(shù)域誤差及分布誤差

　　縮小計(jì)數(shù)域誤差或分布誤差由于血細(xì)胞在充入計(jì)數(shù)室后呈隨機(jī)分布或稱Poisson分布（），而我們所能計(jì)數(shù)的細(xì)胞分布范圍是有限的，由此造成的計(jì)數(shù)誤差稱為計(jì)數(shù)域誤差或分布誤差。縮小這種誤差的有效方法就是盡量擴(kuò)大細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍和計(jì)數(shù)數(shù)目，一般**行誤差估計(jì)，然后決定所需計(jì)數(shù)的數(shù)目和計(jì)數(shù)范圍，只要能將誤差控制在允許范圍內(nèi)即可。Berkson指出，當(dāng)使用同一支吸管、同一面計(jì)數(shù)室，計(jì)數(shù)0.2mm2面積的細(xì)胞數(shù)，有望將CV控制在可接受的7%以內(nèi)。對于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)而言，由于紅細(xì)胞數(shù)量較多，在計(jì)數(shù)室中顯得比較“擁擠”，根據(jù)Poisson公式推斷。欲將誤差控制在變異百分?jǐn)?shù)5%以內(nèi)，至少需要在計(jì)數(shù)室中計(jì)數(shù)400個紅細(xì)胞，因此要求計(jì)數(shù)五個中方格的紅細(xì)胞。事實(shí)上Berkson還通過實(shí)驗(yàn)證明，紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)域誤差為s=0.92，較理論誤差（Poisson分布誤差）要小。

 

3．降低異常標(biāo)本的干擾誤差

　　排除異常標(biāo)本的干擾白細(xì)胞數(shù)量在正常范圍時，相對于紅細(xì)胞數(shù)量來講，其影響可忽略，但如白細(xì)胞過高（>100×109/L），則應(yīng)對計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行校正。方法是：①實(shí)際RBC=計(jì)得RBC-WBC。如當(dāng)紅細(xì)胞換算后為3.5×1012/L、白細(xì)胞換算后為100×109/L時，病人實(shí)際紅細(xì)胞數(shù)應(yīng)為3.4×1012/L。②在高倍鏡下計(jì)數(shù)時，避開有核細(xì)胞。有核細(xì)胞體積比正常紅細(xì)胞大，中央無凹陷，無草黃色折光，可隱約見到細(xì)胞核。此外，當(dāng)病人急性嚴(yán)重貧血時網(wǎng)織紅細(xì)胞可提前大量釋放，也給紅細(xì)胞計(jì)數(shù)帶來一定的干擾，而且影響網(wǎng)織紅細(xì)胞值計(jì)算結(jié)果。其校正方法有待探討。