提取免疫球蛋白IgG的注意事項(xiàng)

來源：上海譽(yù)貿(mào)實(shí)業(yè)有限公司 2013年12月05日 09:02

提取免疫球蛋白IgG的注意事項(xiàng)

1、操作過程可以在室溫下進(jìn)行，但溫度不宜太高，應(yīng)盡量在較低溫度下進(jìn)行，避免蛋白質(zhì)活性喪失；

2、鹽析前，血清要用等量的PBS（0.01mol/L pH7.2）或生理鹽水稀釋，可以減少其他蛋白質(zhì)與γ-球蛋白的共沉現(xiàn)象。蛋白質(zhì)含量低于3%時(shí)可不稀釋；

3、混有鐵離子的硫酸銨須除去鐵離子。方法是用15N NH40H凋pH至9，加熱，產(chǎn)生棕紅色沉淀，用濾紙濾除，再加稀硫酸（硫酸:水=1:2），調(diào)pH7.0～7.2穩(wěn)定24h后再用；

4、飽和硫酸銨應(yīng)逐滴加入，邊加邊攪，以減少局部高濃度硫酸銨所引起的共沉現(xiàn)象，攪拌速度不宜過快，以免產(chǎn)生泡沫；

5、蛋白質(zhì)被沉淀后應(yīng)在冰箱放置隔夜，使能結(jié)成較大的沉淀塊而易于分離。分離（離心沉淀或過濾）沉淀物應(yīng)在4℃條件下進(jìn)行，以免蛋白質(zhì)變性；

6、以上程序（50%飽和度1 次，33%2～3次）可獲得較純的γ球蛋白，有時(shí)尚有混少量的β球蛋白；

7、如提純材料為血漿，則先應(yīng)除去纖維蛋白質(zhì)，方法是：先加入2.0%飽和度的硫酸銨，沉淀纖維蛋白質(zhì)，離心沉淀除去之，然后繼續(xù)加硫酸銨至50%飽和度，以沉淀球蛋白。

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