1. 氨基柱既可以用于正相條件,又可以用于反相條件。
在正相與反相條件互換時(shí)需要注意兩點(diǎn):
1)色譜柱中無緩沖鹽(建議使用乙腈/水=10/90溶液除鹽,1ml/min沖洗色譜柱60min);
2)用異丙醇作為中間的過渡流動(dòng)相(建議流速為0.5或0.8ml/min沖洗色譜柱90min)。
2. 正相條件下使用
1)色譜柱內(nèi)保存流動(dòng)相為正己烷/異丙醇=99.5/0.5,所以,新柱使用正相條件時(shí),可以直接用流動(dòng)相平衡色譜柱,然后檢測。
2)不宜分析含醛基、羰基的化合物,不可用于還原糖的分析;流動(dòng)相要*脫氣,并不得含有羰基化合物和過氧化物(質(zhì)量不好的乙醚、四氫呋喃含有少量羰基化合物和過氧化物)。
3)任何時(shí)候更換流動(dòng)相時(shí)都要確保新流動(dòng)相與柱子原保存液可互溶。
3. 反相條件下使用
1)如色譜柱內(nèi)保存溶液為正相流動(dòng)相,則先用異丙醇以0.5或0.8ml/min的流速?zèng)_洗60min,再用乙腈沖洗色譜柱30min,然后用流動(dòng)相平衡色譜柱(如使用緩沖鹽作流動(dòng)相則先用過渡流動(dòng)相平衡色譜柱,再換分析流動(dòng)相);
2)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH,使其pH范圍在2.0~9.0,通常pH 3.0~7.0比較合適;
3)緩沖鹽的正確使用:過渡流動(dòng)相:有機(jī)相和水相的比例與分析流動(dòng)相相同,但水相中不含緩沖鹽。
4)分析酸性物質(zhì)的注意事項(xiàng):使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時(shí),酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可 能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。
注意事項(xiàng)
氰基色譜柱即可用于正相條件也可用于反相條件,正反相切換時(shí)的注意事項(xiàng)同氨基色譜柱。
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