使用我公司的小鼠雌二醇（E2）試劑盒的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖怯糜跍y(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中雌二醇（E2）含量。下面我們來(lái)說(shuō)一說(shuō)小鼠雌二醇（E2）試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理與操作步驟。
實(shí)驗(yàn)原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠雌二醇（E2）水平。用純化的小鼠雌二醇（E2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入雌二醇（E2），再與HRP 標(biāo)記的雌二醇（E2）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌二醇（E2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中小鼠雌二醇（E2）濃度。
操作步驟
1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
200pmol/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100pmol/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50pmol/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25pmol/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12.5pmol/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl 的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4、 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。