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細胞培養(yǎng)技術(shù)中，細胞計數(shù)是一項基本功，對于標準化培養(yǎng)條件以及需要定量的實驗來說都非常關(guān)鍵。這里介紹使用血細胞計數(shù)器對細胞進行計數(shù)的經(jīng)典方法以及中間一些需要注意的細節(jié)。
制備細胞懸液：
對于貼壁生長的細胞，我們需要首先使用胰酶消化的方法使細胞從培養(yǎng)皿表面脫落
根據(jù)需要加入合適體積的培養(yǎng)基，將細胞進行中和及稀釋，以得到均質(zhì)的細胞懸液。要求盡可能將細胞吹打散開，不要殘留任何細胞團
準備血細胞計數(shù)器：
使用70%乙醇將蓋玻片和血細胞計數(shù)器清潔干凈
將將蓋玻片潤濕（使用水或呼一口氣，目的是使蓋玻片與血細胞計數(shù)器接觸更緊密，易于粘連），并覆蓋至血細胞計數(shù)器上
臺盼蘭染色（可選）：
如果需要計算細胞的活力，則需要將細胞懸液和0.4%臺盼蘭等體積混合
室溫孵育3-5分鐘，使臺盼蘭*進入死細胞，使死細胞著藍色
血細胞計數(shù)器加樣：
使用吸管將細胞懸液或細胞/臺盼蘭混合液滴加到血細胞計數(shù)器計數(shù)池的邊緣。此時液滴將在虹吸的作用下進入蓋玻片下方的計數(shù)池
以同樣的方式在另一側(cè)的計數(shù)池中也加入細胞懸液
將計數(shù)板放置幾分鐘使細胞*擴散，同時用吸水紙吸除多余的液體
細胞計數(shù)：
在100倍顯微鏡下，移動計數(shù)板將視野對準計數(shù)板的中央大方塊，該方塊四周有一圈3條平行線包圍，中間有密集的網(wǎng)格。中央方塊區(qū)差不多剛好可以填滿整個視野（右上圖中標記的3號位置）
使用手持式計數(shù)器記錄計數(shù)池四個角以及中央方塊內(nèi)的細胞數(shù)（1-5號位置，經(jīng)典的current-protocol推薦每個方塊細胞數(shù)應(yīng)不大于20-50），并重復(fù)記錄另一側(cè)計數(shù)池中的細胞數(shù)，總計十個方塊。計數(shù)的方法是只計算上邊和左邊壓線的細胞，而右邊和下邊壓線的細胞不予計算（下圖，總體原則是“計上不計下，計左不計右”，判斷標準為是否接觸三條邊線的中間線）。如果有多個細胞沒有吹散成團存在，此時只可記為一個細胞。如果團塊很多，則可能需要重新吹打甚至消化直至絕大多數(shù)細胞為單個細胞，
計算細胞數(shù)：
由血細胞計數(shù)器的構(gòu)造可以看出，血細胞計數(shù)器每個大方塊可以容納的體積為：
1 mm2×0.1 mm = 0.1 mm3 = 10-4 cm3 = 10-4 ml
也即每個大方塊的體積為萬分之一毫升，因此在計算每毫升液體中的細胞數(shù)時需要乘以104。
在常規(guī)沒有使用臺盼蘭染色時，可以以下面公式計算每毫升培養(yǎng)基中細胞的個數(shù)：
每毫升培養(yǎng)基中細胞的個數(shù) = 每個方塊內(nèi)細胞的平均數(shù) × 細胞稀釋比例 × 104
如何使用了臺盼蘭染色，還需要計算活細胞的比率：
活細胞比率 = 臺盼蘭拒染細胞數(shù) / 總細胞數(shù)
此時細胞數(shù)的計算公式為：
每毫升培養(yǎng)基中活細胞的個數(shù) = 每個方塊內(nèi)細胞的平均數(shù) × 活細胞比率 × 細胞稀釋比例 × 2 × 104
注：乘2是由于在臺盼蘭染色時，進行了等體積混合，相當于稀釋了一倍。
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