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多孔培養(yǎng)板邊緣效應(yīng)的產(chǎn)生和解決方法的探討

來源:上海乾思生物科技有限公司   2014年02月28日 12:59  

    在進行多孔板尤其是96和384孔板細(xì)胞培養(yǎng)時,你可能會發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在孔板中的位置會影響細(xì)胞的生長狀態(tài),特別是處在周邊以及四個角的孔中細(xì)胞通常會表現(xiàn)出分布不均等現(xiàn)象,也就是常說的邊緣效應(yīng)(edge effects)。這對我們的實驗造成了很多的不便,特別是對于藥物篩選相關(guān)研究更是無法回避。
    由于多孔板中四邊孔zui直接與外界環(huán)境接觸,受環(huán)境影響也就zui大。
關(guān)于邊緣效應(yīng)的成因,現(xiàn)有的觀點主要有以下兩點:

溫度效應(yīng)
   由于位置效應(yīng),當(dāng)我們將鋪好的細(xì)胞由室溫轉(zhuǎn)移到37℃培養(yǎng)箱時,周邊孔中的細(xì)胞更傾向于聚集到相對溫暖的邊緣地帶。結(jié)果就是細(xì)胞分布不均,造成一邊細(xì)胞過于擁擠增殖受阻,另一邊卻幾乎沒有細(xì)胞,zui終必然是長勢不及中間孔。

蒸發(fā)效應(yīng)
   雖然通常細(xì)胞培養(yǎng)箱中都會放置一盤雙蒸水以維持培養(yǎng)箱中的濕度,但仍難達(dá)到多孔板中的濕度,特別是在培養(yǎng)箱經(jīng)常開關(guān)的情況更是如此。同樣的由于位置效應(yīng),邊緣孔的濕度較中間孔更低,水分揮發(fā)的現(xiàn)象就更嚴(yán)重。所以經(jīng)常你可能就會看到四周培養(yǎng)基的體積會明顯少于中間孔,而四個角落的孔尤為嚴(yán)重。細(xì)胞在2乘的培養(yǎng)基中生活會是怎樣的一個情形,想象下腌蘿卜就知道了!當(dāng)然這種現(xiàn)象在長時間培養(yǎng)時顯現(xiàn)的尤為突出。

解決方法:
棄為上策
   不能解決,就不用這些周邊的孔,這可說是zui直接的方法。同時再在這些孔中加入培養(yǎng)基或PBS以形成護城河,保護中間孔免受蒸發(fā)效應(yīng)影響。但到底來說這也不算是上上策,畢竟損失近1/3孔(96孔瞬間折損至60孔),尤其是對于像腫瘤干細(xì)胞常用的低黏附培養(yǎng)板這樣造價不菲的培養(yǎng)板,著實“棄不起”。

室溫預(yù)孵育
   前面提到在做藥物篩選時,位置效應(yīng)讓許多人很困惱。有研究者就專門針對溫度效應(yīng)發(fā)表了一篇方法論文[1],驗證了前人提出的一種解決位置效應(yīng)的簡易方法是可行的。該方法就是將鋪好的細(xì)胞在室溫先放置1h,待細(xì)胞完成沉降和貼壁后再放回37℃培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)??雌饋碓摲桨负唵我仔?、幾近,但實際上作者的實驗依據(jù)建立在24h觀察得到數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上,而此時蒸發(fā)效應(yīng)的影響還比較小。因此如果只是短時實驗,相信使用該方法還是不錯的選擇。

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