重組DNA轉化實驗原理：

　　帶有外源DNA的重組體分子在體外構建成后，需要導入適當?shù)乃拗骷毎麅?nèi)進行繁殖或表達出具有一定生物活性的蛋白。能夠作為重組體轉化的受體，主要有動物細胞、植物細胞、微生物細胞等。導入受體細胞的途徑重要有轉化(轉染)，顯微注射和電穿孔等多種不同的方式?？梢愿鶕?jù)不同的受體選擇不同的導入方式。一般情況下，細菌一類的原核生物和酵母這樣的低等真核細胞可用轉化方式導入，而高等動植物細胞則需采用顯微注射或電穿孔來進行。

　　細菌表面通過CaCl2處理后，局部失去細胞壁或細胞壁溶解，DNA分子能夠通過質膜進入細胞。其進入細胞的方式是完整的雙鏈DNA分子首先吸附到細胞表面，雙鏈DNA分子解鏈變成單鏈，單鏈DNA分子一條進入受體細胞內(nèi)，另一條被降解。進入細胞內(nèi)的單鏈DNA則復制成雙鏈環(huán)狀DNA，隨同復制子同時復制，并被轉錄翻譯。

　　實驗方法(用CaCl2制備新鮮的感受態(tài)細胞轉化法)：

　　感受態(tài)細菌制備

　　(1) 挑取在平板上活化的菌落接種于2毫升LB培養(yǎng)液中，在370C培養(yǎng)過液。

　　(2) 按1%挑取過液培養(yǎng)菌接種于50mlLB培養(yǎng)液中，370C振蕩培養(yǎng)2~2個半期小時(OD600約在0.2~ 0.4) 。

　　(3) 培養(yǎng)物放冰浴中冷卻10分鐘。

　　(4) 分裝離心管中，40C5000rpm離心5min，收集菌體，培養(yǎng)液盡量倒干凈。

　　(5) 把菌體懸浮于10 ml的100mmol/L CaCl2 溶液，置冰浴中20min，40C5000rpm離心5min，收集菌體。

　　(6) 再將菌體懸浮于1-2ml的100mmol/L CaCl2 溶液中，40C保存，12-24小時后即可作為感受態(tài)細胞進行轉化。

　　轉化實驗

　　(7) 取200ml感受態(tài)菌，加入待轉化的重組DNA(體積應小于10ml，DNA<50 ng)混勻后置冰浴中30min(一般同時要做陽性對照和陰性對照。陽性對照為加入已知量的未重組質粒DNA的感受態(tài)菌，用于檢測轉化效率。陰性對照為*不加質粒DNA的的感受態(tài)菌，用于檢測感受態(tài)細菌有無污染及檢測抗生素的活性)。

　　(8) 放入冰浴中30 min，轉入420C水浴90s，再冰浴1-2 min，加入培養(yǎng)液800ml，放370C振蕩培養(yǎng)45min。

　　(9) 將適當體積已轉化的感受態(tài)細胞均勻鋪于平皿上。

　　(10)待平皿中液體吸收后，倒置平皿，于370C培養(yǎng)12-16小時可出現(xiàn)菌落。

　　更多DNA轉化實驗方法就在北京杰輝博高生物，請。