酶標(biāo)試劑的說(shuō)明和應(yīng)用
酶標(biāo)抗體僅需適當(dāng)?shù)孜锖推胀ü鈱W(xué)顯微鏡即可高度敏感地檢出抗原。由于信號(hào)是通過(guò)吸收光的差異,而非發(fā)射光來(lái)檢測(cè),底物的不溶性顯色產(chǎn)物分布在酶所在位置的周圍區(qū)域,因此這種檢測(cè)方法尚不能達(dá)到熒光技術(shù)的分辨率。
酶反應(yīng)后出現(xiàn)沉淀,在酶所處位置周圍產(chǎn)生不溶性顯色產(chǎn)物,通過(guò)底物的顯色來(lái)檢出酶標(biāo)試劑所處位置。多種酶及底物可供選擇,但近年來(lái)多選用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)及底物二氨基聯(lián)苯胺(DAB)來(lái)進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞的染色。HRP可與抗Ig抗體、蛋白A、蛋白G、親和素或鏈霉親和素等共價(jià)偶聯(lián),其中任何一種二級(jí)試劑均可用于檢測(cè)與目標(biāo)抗原結(jié)合的一抗的位置。
細(xì)胞染色法如果實(shí)驗(yàn)要求操作簡(jiǎn)單,用同一條件觀察大量樣品,用酶聯(lián)檢測(cè)法較好;如實(shí)驗(yàn)要求高分辨率,則應(yīng)用熒光素標(biāo)記檢測(cè)法;共聚焦顯微鏡比相差顯微鏡具有更高的分辨率。如考慮敏感性,選用共聚焦顯微鏡法,再依次為酶聯(lián)法及熒光顯微鏡法。如考慮到價(jià)格因素,則酶聯(lián)法為。
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