手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
1.裝柱：
1.1 取出層析柱，用去離子水沖洗干凈，連接好管子后固定柱子;
1.2用水沖洗層析柱3-5次，每次10ml去離子水;
1.3取出填料，靜止至室溫后，根據(jù)需要用移液器取出3-5ml的填料進行裝柱;
1.4用去離子水沖洗填料5個柱體積;
2.柱的平衡與上樣：
2.1用0.02M TB bufferA 緩沖液(PH7.6)平衡Ni柱，直至流出液的pH為7.6; 2.2對處理的樣品進行過濾后，緩慢上樣讓蛋白充分結(jié)合;
3.洗雜蛋白：
3.1用0.02M TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，清洗沒有結(jié)合到層析柱上的雜蛋白，至流出液與緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
3.2用含10mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，共洗約30ml，至流出液與含10mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
3.3用含20mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，共洗約30ml，至流出液與含20mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
3.4用含40mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，共洗約30ml，至流出液與含40mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
3.5用含60mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，共洗約30ml，至流出液與含60mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
3.6用含80mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，共洗約30ml，至流出液與含80mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
3.7用含100mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，共洗約30ml，至流出液與含100mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
(具體的洗脫梯度需根據(jù)實驗自行調(diào)整)
4.解離目的蛋白：
4.1用含100mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，共洗約30ml，至流出液與含100mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
4.2 用含200mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，共洗約30ml，至流出液與含200mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
4.3 用含500mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，共洗約30ml，至流出液與含500mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
4.4用含1000mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱，共洗約30ml，至流出液與含1000mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止，流出液取20ul做SDS-PAGE檢測;
(具體的洗脫梯度需根據(jù)實驗自行調(diào)整)
5.柱的清洗與保存：
5.1用含1000mMNaCL的TB bufferA緩沖液(PH7.6)以沖洗層析柱，共沖洗30ml; 5.2用濃度為1.5M的NaCl溶液沖洗層析柱，共沖洗30ml; 5.3用過濾去離子水沖洗50ml;
5.4用20%乙醇沖洗30ml后于4℃20%乙醇中保存。
相關(guān)產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權(quán)等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心