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問：我的細(xì)胞接種培養(yǎng)板，細(xì)胞總是聚集在周邊部分，該如何處理?。课铱磮@子里有的戰(zhàn)友的細(xì)胞卻是聚集在中間，是不是板子的質(zhì)量問題啊？
答：請問你的細(xì)胞是如何混勻的？是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板？如果是后者，而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細(xì)胞甩到周邊部分，導(dǎo)致細(xì)胞中間少，四周多！自己可是試試！
周邊一般是相對會多一點(diǎn)，但是中間的數(shù)量也不會很少啊~~ 鋪板的時候我也沒有特異去振蕩培養(yǎng)板。
大概是板子的質(zhì)量問題吧或者是不是鋪板時候的細(xì)胞密度太低了？我用的corning的板 。
一個好辦法：在你培養(yǎng)種板之前，把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里進(jìn)行幾個小時的飽和后再取出，種入細(xì)胞時力量要輕，可采取用滴頭在培養(yǎng)板孔的側(cè)面慢慢加入讓細(xì)胞懸液流入板孔中，培養(yǎng)的細(xì)胞基本是均勻生長。記住千萬不要用振蕩器振蕩，否則你的細(xì)胞就會想你說得那樣聚積在一起。
我今天把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里幾個小時，適當(dāng)?shù)陌鸭?xì)胞密度加大了一下，另外多加了一點(diǎn)培養(yǎng)液，今晚看細(xì)胞鋪的挺好的。
我認(rèn)為有兩種可能解決你問題的辦法:
1.加入前吹打均勻;
2.從多孔板側(cè)邊或底邊緩慢加入。
我在做原代培養(yǎng)時也遇到過這種情況，我一直以為培養(yǎng)皿鋪膠不均勻會導(dǎo)致這種現(xiàn)象，因?yàn)榛靹虻难芏渭尤氲脚囵B(yǎng)皿中時，在相差顯微鏡下血管段均勻分布在培養(yǎng)皿中，24h后貼壁的血管段就是周邊多，中間相對少些。下次我要試試hkqu戰(zhàn)友的方法看能否改變這種現(xiàn)象。謝謝指點(diǎn)！
這種現(xiàn)象很正常呀，不知你仔細(xì)觀察過沒有，孔直徑愈小，這個現(xiàn)象越明顯，我試過，24、96孔板這種現(xiàn)象不可避免，因?yàn)橐后w的附壁使得孔內(nèi)培養(yǎng)液不是成一個液平面，而是周邊高，就像凹鏡一樣，而使用這兩種孔板由于需要加干預(yù)等原因而不能加足量培養(yǎng)液，使得細(xì)胞隨培養(yǎng)液一起出現(xiàn)“邊集”現(xiàn)象，如果為了使孔中央也有均勻細(xì)胞而增加接種細(xì)胞數(shù)量的話，這要看你需要觀察何種指標(biāo)，如果是MTT ，免疫組化的話會因?yàn)榧?xì)胞成層而影響結(jié)果。
贊成hkqu戰(zhàn)友的建議，個人認(rèn)為消化細(xì)胞時要注意吹打均勻，避免細(xì)胞成團(tuán)，而且孔內(nèi)培養(yǎng)液量要足夠，我一般接種時加足量培養(yǎng)液，加干預(yù)時換一次液，干預(yù)液加培養(yǎng)液量等于接種時培養(yǎng)液量，這樣的話“邊集”現(xiàn)象會有所改觀，不妨一試。
我想我們做課題，實(shí)驗(yàn)的目的是為了驗(yàn)證或探索某些理論，而不是要所謂的“好看”，“美”。還記得魯迅的文章《藤野》一文嗎？我們很多年以前學(xué)過的，藤野對魯迅說得話大家不防重溫一下，我想這正是我們要學(xué)習(xí)的地方。
我做的是空斑形成實(shí)驗(yàn)，是細(xì)胞鋪成均勻的一層，昨天接種病毒時大部分孔都還好，個別的不太均勻。
現(xiàn)在我細(xì)胞實(shí)驗(yàn)也做了一段時間了，但在實(shí)驗(yàn)中平行組的差距還是比較大。
有時候一組數(shù)據(jù)大多是差不多的，偏偏會跳出一個相去甚遠(yuǎn)的數(shù)據(jù)。
我想應(yīng)該不是我細(xì)胞加入時的問題，因?yàn)槲业慕M間差距大是出現(xiàn)在加樣的組中，而對照組的數(shù)據(jù)卻相當(dāng)?shù)姆€(wěn)定。另外，我的樣品是*均勻的液體，照理應(yīng)該是不會出現(xiàn)上述問題的。
我也出現(xiàn)了這樣的問題。我加入細(xì)胞的時候是用吸管邊吹打邊用一毫升的槍加入12孔板中的，可是組內(nèi)差異仍然很大，想請教一下大家加細(xì)胞的時候都有什么方法呀？
我覺得有幾點(diǎn)：
1.細(xì)胞消化后吹打成單細(xì)胞懸液很關(guān)鍵！保證分板時每個孔的細(xì)胞數(shù)目是一致的！
2.當(dāng)然還有你的處理因素各個孔之間的平行也很重要，比如說加藥時，藥物稀釋后混勻，保證每個孔的濃度是一致的！
3.再者加細(xì)胞和藥物時，要試驗(yàn)組和對照組一塊輪流加，避免加樣先后順序?qū)е录?xì)胞密度和藥物濃度的差異?。?/div>
吹打已經(jīng)是均勻了，但是鋪板，6孔，24孔總有些不均勻的哦，有點(diǎn)愛往中間集中。而且明明計數(shù)好了鋪了，長一兩天，各個孔密度就有點(diǎn)不一樣，對檢測有影響，能指教一下，有良策嗎？
1.如果用巴氏吸管鋪的話，每次吸取的量不要太多，因?yàn)槲軆?nèi)的細(xì)胞會自動向下沉，往往*開始幾個孔細(xì)胞數(shù)多，經(jīng)常均勻細(xì)胞懸液，加液走S型路線。
2.如果用移液器的話，tips要處理下，把去掉避免損傷細(xì)胞，這樣每一次取液對應(yīng)一個孔。用tip一對一孔加入比較準(zhǔn)確。但也要注意混勻懸液。
3.設(shè)立平行組，n要足夠大（可以計算一下）。
4.鋪板后不要搖，因?yàn)閾u動會導(dǎo)致細(xì)胞向中間聚集。鋪板一次搞定。
鋪板后不要做圓周的晃動，做十字晃動，即上下左右晃動，否則會使細(xì)胞旋到當(dāng)中去。
移液器的槍頭沿著培養(yǎng)板壁加，就不會集中到中間了。
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