PeproTech公司的重組細胞因子產(chǎn)品經(jīng)過了十分嚴格的生產(chǎn)、純化及質(zhì)檢過程,保證其在投放市場之前,達到如下要求:
1. 真實性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析;必要時應用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測其真實性。
2. 純度:應用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產(chǎn)品純度。
3. 生物活性:進行相應的體外(in vitro)或體內(nèi)(in vivo)活性檢測。
4. 蛋白含量:通過紫外光譜分析,SDS-PAGE電泳檢測;必要時應用HPLC定量標準蛋白溶液。
5. 內(nèi)毒素:kinetic LAL法檢測內(nèi)毒素。
6. 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理。
產(chǎn)品隨附的說明書上載有產(chǎn)品的各項相關信息。請仔細閱讀這些信息,了解其配制和貯存提示。如果在閱讀說明書后仍需更多信息,請查看以下常見問題解答,或致電我們的技術(shù)服務部門。
重組細胞因子的凍干狀態(tài)
與市場上已有的其他蛋白產(chǎn)品不同,PeproTech細胞因子不含carrier protein或其他添加物(如BSA、HAS、蔗糖等),而是以低鹽的形式做凍干處理,因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi),形成很薄或不可見的蛋白層。PeproTech的質(zhì)控過程確保每管裝有非常準確量的蛋白產(chǎn)品。所以我們建議在收到試劑后,務必于開蓋前先離心20-30秒,使可能附于管蓋或管壁的蛋白成分聚集于管低(此時能否見到白色沉淀均屬正?,F(xiàn)象)。
重組細胞因子活性單位(units)的換算
各公司在開發(fā)出重組細胞因子并檢測其活性后,通常會以ED50(半數(shù)有效濃度)或units(活性單位)來標識其細胞因子的生物活性。因此1mg細胞因子中所含的活性單位(units)可以理解為將1mg/ml細胞因子原液稀釋成ED50的稀釋倍數(shù),以下是二者的換算公式:重組細胞因子的穩(wěn)定性
除非產(chǎn)品說明書上另有特別說明,否則所有PeproTech蛋白產(chǎn)品都為凍干粉形式,在室溫下也能保持很好的穩(wěn)定性。但是,我們推薦凍干產(chǎn)品保存于-20℃。大多數(shù)凍干產(chǎn)品經(jīng)溶解和稀釋后,可短時間保存于4℃;若要進行較長時間保存,我們建議稀釋到工作液濃度并加入一定的carrier protein(如0.1% BSA),然后分裝保存于-20℃。請注意每一次凍融過程都會造成蛋白的部分變性,應避免反復凍融。
重組細胞因子的交叉活性
除了少數(shù)例外,大多數(shù)人類細胞因子對小鼠細胞都有活性。許多小鼠細胞因子對人類細胞也有活力表現(xiàn),但是與相應的人類細胞因子相比比活力較低。一些人類的細胞因子如IL-7在小鼠細胞中甚至表現(xiàn)出比相應的小鼠細胞因子更高的比活力。而干擾素、GM-CSF、IL-3 和IL-4 是物種特異性的,對于非人類細胞幾乎沒有活性。相反,成纖維細胞生長因子 (FGFs) 和神經(jīng)營養(yǎng)因子 (neurotrophins) 是高度保守的,在其它的動物物種細胞中也能表現(xiàn)很好的活性。
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