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紫外分光光度計(jì)的組成、原理和應(yīng)用

來源:上海添時(shí)科學(xué)儀器有限公司   2014年10月14日 10:14  

紫外分光光度計(jì)組成: 

  各種型號(hào)的紫外-可見分光光度計(jì),就其基本結(jié)構(gòu)來說,都是由五個(gè)基本部分組成,即光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器及信號(hào)指示系統(tǒng)。圖13-14  

 

1.光源 

在紫外可見分光光度計(jì)中,常用的光源有兩類:熱輻射光源和氣體放電光源。         

熱輻射光源用于可見光區(qū),如鎢燈和鹵鎢燈;氣體放電光源用于紫外光區(qū),如氫燈和氘燈。 

2.單色器 

單色器的主要組成:入射狹縫、出射狹縫、色散元件和準(zhǔn)直鏡等部分。 

單色器質(zhì)量的優(yōu)劣,主要決定于色散元件的質(zhì)量。色散元件常用棱鏡和光柵。 

3.吸收池 

吸收池又稱比色皿比色杯,按材料可分為玻璃吸收池和石英吸收池,前者不能用于紫外區(qū)。吸收池的種類很多,其光徑可在0.1~10cm之間,其中以1cm光徑吸收池為常用。 

4、檢測(cè)器 

檢測(cè)器的作用是檢測(cè)光信號(hào),并將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)?,F(xiàn)今使用的分光光度計(jì)大多采用光電管或光電倍增管作為檢測(cè)器。 

5、信號(hào)顯示系統(tǒng) 

常用的信號(hào)顯示裝置有直讀檢流計(jì),電位調(diào)節(jié)指零裝置,以及自動(dòng)記錄和數(shù)字顯示裝置等。

 

紫外分光光度計(jì)基本原理: 

分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后,發(fā)生了電子能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜,反映了分子中某些基團(tuán)的信息,可以用標(biāo)準(zhǔn)光譜圖再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。 

朗伯-比爾定律:當(dāng)一束平行單色光通過含有吸光物質(zhì)的稀溶液時(shí),溶液的吸光度與吸光物質(zhì)濃度、液層厚度乘積成正比,即A= kcl 

   式中比例常數(shù)k與吸光物質(zhì)的本性,入射光波長(zhǎng)及溫度等因素有關(guān)。c為吸光物質(zhì)濃度,l為透光液層厚度。 

紫外分光光度計(jì)應(yīng)用: 

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸、蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。我們實(shí)驗(yàn)室主要是用來測(cè)物質(zhì)的光度以求得物質(zhì)的濃度或者酶活。 

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