為什么要熱滅活血清
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時,推薦使用熱滅活血清。
有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節(jié)省您寶貴的時間,更確保血清的質(zhì)量!
熱滅活血清操作步驟
血清買回來滅活前凍融應(yīng)逐級凍融,即按照-20℃——4℃*融化后,再置入水浴中,與室溫一起升高到56度,這樣的目的是避免溫度驟變,導(dǎo)致血清中的營養(yǎng)物質(zhì)喪失活性。
血清滅活后分裝保存。按照每次用血清的量分裝,盡量減少血清凍融的次數(shù)。分裝時注意無菌。
細(xì)胞培養(yǎng)時血清濃度稍大一些。通常細(xì)胞培養(yǎng)血清濃度為10%-15%,但如果血清凍融次數(shù)過多,那營養(yǎng)物質(zhì)喪失活性,按15%的濃度配制事實(shí)上達(dá)不到15%的營養(yǎng)成分,故培養(yǎng)基配置時一般用18%-20%的血清。
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