水質(zhì)細(xì)菌檢驗(yàn)箱
采樣檢驗(yàn)箱使用方法
1、 細(xì)菌中數(shù)檢驗(yàn)方法
1. 1試驗(yàn)準(zhǔn)備:
1.1. 1水樣采集:采水容器事先滅菌或使用前用被檢水反復(fù)沖洗數(shù)次,然后采水。1.1.2移液管吸嘴的消毒:取下套在酒精燈上的支架,把支架小口端安裝在酒精燈口上, 杯放在支架上,倒入適量水,把吸嘴放入 杯內(nèi),煮沸5-10分鐘,備用。
1.2. 肉湯營養(yǎng)紙墊制備:
1.3. 1將小皿用酒精棉球擦拭消毒,晾干后每皿加一片紙墊。
1.2.2取肉湯安瓶一支倒人小杯內(nèi),加入15mi蒸餾水或自來水煮沸溶解即為營養(yǎng)肉湯。必要時(shí)??梢灾苯佑瞄_水沖泡溶解。
1.2.3取盛有紙墊小皿,每皿紙墊加營養(yǎng)肉湯1.8-2.5ml(液體充盈程度以不淹沒濾膜為宜),即為肉湯營養(yǎng)墊,備用。
1.3檢驗(yàn)水樣:
1.3. 1細(xì)菌過濾器系統(tǒng)的組裝;從檢驗(yàn)箱中取出過濾器,將濾床 板端插入檢驗(yàn)箱前側(cè)箱壁與塑料板之間的夾縫內(nèi),把三通管帶細(xì)塑料管一端插入濾器下面的孔內(nèi),三通管大孔端插入20ml注射器頭下,接頭處要嚴(yán)密。備用。
1.3.2細(xì)菌過濾器的處理:用燃著的酒精棉球擦拭細(xì)菌過濾器的濾床和漏斗,待涼后,取一片濾膜,放在濾床上,裝上漏斗并擰緊。
1.3.3過濾水樣:生活飲用水為1ml,平分兩份,水源水可同時(shí)做原水1ml和稀釋50倍(箱內(nèi)50ml小瓶放入1ml被檢水源水,家50ml冷開水或無菌水)1ml兩個(gè)稀釋度,水樣加到濾器中后使之全部覆蓋膜面,然后抽濾至水干,將阻菌濾膜面朝上貼于肉湯營養(yǎng)墊上。注意膜與營養(yǎng)墊之間不要有氣泡。
1.4培養(yǎng):37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。
1.5菌落計(jì)數(shù):計(jì)數(shù)膜上所有菌落數(shù)。
細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法:
細(xì)菌總數(shù)(個(gè)/ml)=膜上的平均菌落數(shù)*稀釋倍數(shù)
1. 6注意事項(xiàng):
1.6.1 檢驗(yàn)細(xì)菌總數(shù)過程中應(yīng)盡量做到無菌操作。
1.6.2 每檢驗(yàn)完一個(gè)水樣應(yīng)用燃著的酒精棉球燒灼漏斗和濾床后,再進(jìn)行檢驗(yàn)第二個(gè)樣品。
1.6.3 每次試驗(yàn)完畢,必須用干紗布把過濾漏斗和濾床等處擦干,以免腐蝕漏斗。
2、 大腸菌群檢驗(yàn)方法:
2.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備: 同細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)方法(1.1)
2.2 遠(yuǎn)藤營養(yǎng)墊的制備:
2.2.1 將小皿用酒精棉球擦拭消毒、晾干。每皿內(nèi)加一片紙墊。
2.2.2 取遠(yuǎn)藤培養(yǎng)基安瓶一支,倒人小杯內(nèi),從酒精棉球瓶內(nèi)取出棉球擠壓1-2滴酒精于培養(yǎng)基上使其剛好濕透,用玻棒攪勻,然后加15ml冷開水或蒸餾水,搖勻溶解即為遠(yuǎn)藤營養(yǎng)墊。
2.2.3 取盛有紙墊培養(yǎng)皿,每皿紙墊加遠(yuǎn)藤培養(yǎng)液1.8-2.5ml(液體充盈程度以不淹沒濾膜為宜),即為遠(yuǎn)藤營養(yǎng)墊。
2.3 檢驗(yàn)水樣:
2.3.1 細(xì)菌過濾器系統(tǒng)的組裝: 同細(xì)菌總數(shù)(1.3.1)
2.3.2 細(xì)菌過濾器系統(tǒng)的處理: 同細(xì)菌總數(shù)(1.3.2)
2.3.3 過濾水樣:生活飲用水,應(yīng)檢100-330ml,將被檢水樣倒入漏斗內(nèi)至上刻度線處(100ml),檢驗(yàn)330ml水量時(shí),可過濾100ml后,再加100ml,直至濾完330ml,(如遇不易過濾水,可分2-3張膜過濾,分別貼于2-3個(gè)遠(yuǎn)藤應(yīng)營養(yǎng)紙墊上,結(jié)果將膜上菌落數(shù)相加計(jì)算),將膜取下,小心貼于備用的遠(yuǎn)藤營養(yǎng)紙墊上。此時(shí)應(yīng)注意勿使濾膜與營養(yǎng)墊之間留有氣泡;檢驗(yàn)未處理的水源水,取1ml水眼個(gè),方法:同細(xì)菌總數(shù),不同處僅把阻菌膜貼于遠(yuǎn)藤營養(yǎng)墊上。
2.4 培養(yǎng):37℃培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)18-24小時(shí)。
2.5 菌落計(jì)算: 計(jì)數(shù)膜上帶有金屬光澤或深黑色菌落。即為大腸菌數(shù)。
大腸菌群數(shù)計(jì)算方法:
大腸菌群數(shù)(個(gè)/升)= 膜上菌落數(shù)*稀釋倍數(shù) *1000
被檢水樣體積(ml)
2.6注意事項(xiàng):同一水樣,同時(shí)檢驗(yàn)細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群時(shí),可不處理濾器;其它項(xiàng)同細(xì)菌總數(shù)(1.6)
3\水中腸道致病菌(沙門氏菌屬和志賀氏菌屬)檢驗(yàn)方法:
3.1 快速檢驗(yàn)法:
3.1.1增菌培養(yǎng):
3.1.1.1 直接增菌法:吸取待檢水樣10ml放入增菌瓶中,加入一小管(0.44g)沙門氏菌—志賀氏菌通用增菌培養(yǎng)基,充分振搖攪拌使其溶解。然后置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。
3.1.1.2濃縮增菌法:吸取待檢水樣100ml(更大或更小體積的水樣,視水質(zhì)而定)通過濾膜過濾,然后將阻菌濾膜取下,放入含有一小管(0.44g)沙門氏—志賀氏菌通用增菌培養(yǎng)基的10ml增菌液中(可用被檢水或無菌蒸餾水配制增菌液)置37℃培養(yǎng)箱,培養(yǎng)24小時(shí)。
3.1.2 協(xié)同凝集試驗(yàn):具體步驟見“協(xié)同凝集試驗(yàn)方法”。不同種類的抗原液(即不同種類的沙門氏菌、志賀氏菌增菌后的菌懸液)分別用對(duì)應(yīng)的凝集試劑進(jìn)行協(xié)同凝集試驗(yàn),根據(jù)凝集與否判斷為陽性或陰性。
3.1.3 協(xié)同凝集試驗(yàn)方法:
3.1.3.1 取0.5ml生理鹽水將協(xié)同凝集試劑溶解,用手搖勻。
3.1.3.2 取1滴凝集試劑于載玻片上,加一滴抗原液(經(jīng)增菌液培養(yǎng)24小時(shí)的水樣),充份混勻,1-3分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。
3.1.3.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):
懸液*透明,出現(xiàn)大量凝塊和顆粒為++++
透明度稍差,出現(xiàn)大量凝塊和顆粒為+++
懸液半透明,凝塊和顆粒較少為++
懸液不透明,有少量顆粒為+
懸液渾濁,無顆粒出現(xiàn)為—
++以上為陽性,+為可疑。
對(duì)照:標(biāo)準(zhǔn)抗原作陽性對(duì)照
生理鹽水作陰性對(duì)照
3.1.3.4 注意:協(xié)同凝集試劑應(yīng)置低溫冷凍保存,有效期3年。
3.2 常規(guī)檢驗(yàn)方法:
3.2.1 增菌培養(yǎng):快速檢驗(yàn)法中的直接增菌法和濃縮增菌法相同,其中志賀氏菌的增菌時(shí)間可以為16-18小時(shí)。
3.2.2 平板分離:取上述經(jīng)增菌的沙門氏菌、志賀氏菌培養(yǎng)液,用接種環(huán)化線接種改良SS選擇瓊脂平板,置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。(如使用其它選擇培養(yǎng)基時(shí),請(qǐng)注意對(duì)宋內(nèi)氏痢疾桿菌是否良好,還是不生長或生長很差)。
3.2..3 挑選菌落接種雙糖管:每個(gè)平板挑取5個(gè)以上可疑腸道病原菌菌落,接種于雙糖鐵或三糖鐵試管培養(yǎng)基中(將克氏雙糖鐵干燥培養(yǎng)基加水煮沸溶解后分裝于塑帽試管中,3ml,高壓蒸汽滅菌或水浴100℃15分鐘后放成高層斜面,凝固后即成)。置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-24小時(shí)。
附:沙門氏菌屬和志賀菌屬在改良SS選擇瓊脂平板上的菌落特征:
沙門氏菌屬,菌落呈無色透明或半透明或中間有黑心,直徑為1-3毫米(培養(yǎng)時(shí)間長時(shí),有的菌落中心略呈微粉色,但與紅色的大腸菌菌落*不同)。
志賀氏菌屬,菌落呈無色透明或半透明(宋氏痢疾桿菌的菌落中心有時(shí)略呈淺色),直徑1-3毫米。
3.2..4 生化反應(yīng)及血清學(xué)檢驗(yàn):
沙門氏菌屬:在雙糖鐵或三糖鐵培養(yǎng)基上,底層變黃(分解葡萄糖產(chǎn)酸),產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣(如傷寒沙門氏菌不產(chǎn)氣),一般產(chǎn)H2S;斜面呈紅色(不分解乳糖)。用沙門氏菌多價(jià)血清或單價(jià)抗血清進(jìn)行凝集試驗(yàn),根據(jù)凝集與否判斷為陽性或陰性。
志賀氏菌屬:在雙糖鐵或三糖鐵培養(yǎng)基上,底層變黃(分解葡萄糖產(chǎn)酸),不產(chǎn)氣,無動(dòng)力,不產(chǎn)H2S;斜面呈紅色(不分解乳糖)。用志賀氏菌多價(jià)血清或單價(jià)血清進(jìn)行凝集試驗(yàn),根據(jù)凝集與否判斷為陽性或陰性。
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