山東農(nóng)業(yè)大學(xué)的趙老師于去年12月在我公司代測豬瘟抗體,白介素,干擾素等相關(guān)系列21個指標(biāo)的ELISA實驗:現(xiàn)需發(fā)表文獻(xiàn)特我公司關(guān)于豬瘟抗體等實驗的詳細(xì)操作流程,我司技術(shù)做出如下詳細(xì)解答:
1.用包被液將豬瘟弱毒單抗純化酶聯(lián)抗原、豬瘟強毒單抗純化酶聯(lián)抗原各做100倍稀釋,每孔包被100μl,4℃濕盒放置一夜。
2.次日取出,甩去孔內(nèi)液體,3×3′沖洗。
3.將待檢血清以PBS液做400倍稀釋,每孔加100μl同時將豬瘟陽性血清、豬瘟陰性血清各做100倍稀釋,于對照孔中加100μl。37℃溫育1.5h~2h。
4.重復(fù)第二步,取出,甩去孔內(nèi)液體,3×3′洗滌。
5.將兔抗豬IgG酶標(biāo)抗體以PBS液做100倍稀釋,每孔加100μl,37℃溫育1.5h~2h。
6.重復(fù)第4步。
7.每孔加底物溶液100μl,室溫下觀察顯色反應(yīng)。當(dāng)陰性對照孔稍顯色時,立即終止反應(yīng),并以陰性孔做空白對照。
8.每孔加終止液50μl立即于酶聯(lián)免疫吸附檢測儀測定490nm波長的光密度。
(三)結(jié)果判定
在豬瘟弱毒酶聯(lián)板上,OD≥0.2,為豬瘟弱毒抗體陽性;OD<0.2,為豬瘟弱毒抗體陰性。
在豬瘟強毒酶聯(lián)板上,OD≥0.5,為豬瘟強毒抗體陽性;OD<0.2,為豬瘟強毒抗體陰性。
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