近些年來(lái)，免疫學(xué)分析方法發(fā)展很快，特別是在使用標(biāo)記了的抗原和抗體的分析技術(shù)以后，使原來(lái)許多經(jīng)典的分析方法在敏感性和特異性方面都不能相比。ELISA試劑盒有著高特異性、靈敏性等優(yōu)點(diǎn)，接觸ELISA實(shí)驗(yàn)的科研檢測(cè)員也越來(lái)越多，那么ELISA新手操作實(shí)驗(yàn)之前需要做哪些準(zhǔn)備?

　　①標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存。

　?、趥浜盟袑?shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等。

　?、鄹鶕?jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。

　　④按說(shuō)明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑。

　　⑤ 選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì);若選擇兩個(gè)單抗，必須識(shí)別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對(duì)。

　　⑥ ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測(cè)抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。

　?、咭话愦郎y(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml?？衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。

　　⑧若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。

　?、針?biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說(shuō)明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。