植物吲哚乙酸(IAA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

48pmol/L  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

24pmol/L  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

12pmol/L  3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6pg/ml  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3pg/ml  1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150μl 的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

重復(fù) 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

植物吲哚乙酸(IAA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中植物吲哚乙酸（IAA）水平。用純化的植物吲哚乙酸（IAA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物吲哚乙酸（IAA），再與 HRP 標(biāo)記的吲哚乙酸（IAA）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物吲哚乙酸（IAA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在

450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中植物吲哚乙酸（IAA）濃度。