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質(zhì)粒DNA蛋白細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過(guò)程與材料
安裝16 cm 長(zhǎng)的電泳玻璃板和1. 5 mm 厚的墊片。在40 ml 低離子強(qiáng)度凝膠混合液中加100 μl 30%的過(guò)硫酸銨及34 μl TDMED，灌入玻璃板之間，插入齒寬≥7 mm 的梳子。讓膠聚合20 min。將梳子和底邊的墊片取出。將膠放入盛有低離子強(qiáng)度電泳緩沖液的電泳漕中，用雙頭泵以5~30 ml/min 循環(huán)電泳緩沖液。
在微量離心管中，加終體積15 μl 的下列成分：10 000 c/min 的DNA探針，終濃度300 μg/ml BSA，及取自緩沖液中的粗制蛋白提取物中的大約15 μg 蛋白質(zhì)?；靹颍?0℃水浴15 min。在1個(gè)加樣孔加入少量10×加樣緩沖液并讓染料跑進(jìn)膠。在其他孔中加各結(jié)合反應(yīng)液，在約30~35mA下電泳，直至溴酚藍(lán)（相當(dāng)于約70 bp 的條帶）達(dá)到膠底。
卸下凝膠電泳裝置，撬開(kāi)電泳玻璃板，將粘附了凝膠的玻璃板平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，在膠上放置3張Whatman 3MM濾紙。將濾紙連同凝膠一起揭下。用塑料薄膜包裹凝膠進(jìn)行真空干燥。在不使用增感屏的條件下，凝膠膜放射自顯影，或用增慼屏放射自顯影2~3 h。DNA復(fù)合物的清晰電泳條帶。
實(shí)驗(yàn)材料 質(zhì)粒DNA
試劑、試劑盒 dNTPDNA聚合酶Klenow酶TETAE溴化乙錠TEMED過(guò)硫酸銨BSA
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